[發(fā)明專利]特異性IgE抗體的檢測方法、該方法所使用的試劑盒以及該試劑盒的制備和使用方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410082987.6
• 申請日: 2014-03-07
• 公開（公告）號: CN103837674A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李會(huì)強(qiáng);朱黎娜;侯麗英;張盈瑩;楊維利;呼蓓蓓
• 申請（專利權(quán)）人: 天津醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/531
• 代理公司: 天津?yàn)I?？凭曋R產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12211
• 代理人: 楊慧玲

1.特異性IgE抗體的檢測方法，其特征在于：包括如下步驟：（1）用抗人-IgE抗體包被酶標(biāo)反應(yīng)板；（2）將已知抗原標(biāo)記生物素分子，形成生物素標(biāo)記的抗原；（3）在檢測sIgE時(shí)，根據(jù)患者病史確定疑似食物過敏原種類和需要檢測孔的數(shù)量；根據(jù)選定的過敏原選擇對應(yīng)的生物素化抗原，每種生物素化抗原分別加入酶標(biāo)反應(yīng)板上的不同檢測孔中，檢測孔再中分別加入待檢血清樣本；如樣本中存在與生物素標(biāo)記的抗原對應(yīng)的sIgE，此待檢sIgE將同時(shí)與該對應(yīng)的生物素化抗原和酶標(biāo)反應(yīng)板表面包被的抗人IgE抗體結(jié)合；（4）洗滌去除檢測孔中未結(jié)合的生物素標(biāo)記抗原，再加入酶標(biāo)記的鏈霉親和素溶液，使之與生物素結(jié)合，如果待檢樣本中存在與生物素標(biāo)記的抗原對應(yīng)的sIgE，檢測板表面將形成抗人IgE-待檢sIgE-已知生物素標(biāo)記抗原-鏈霉親和素-酶復(fù)合物；（5）最后加入顯色底物，終止催化反應(yīng)后用酶標(biāo)儀讀取吸光度值，即可確定過敏原種類。

2.應(yīng)用權(quán)利要求1所述的特異性IgE抗體的檢測方法所使用的試劑盒，其特征在于：至少包括如下試劑：（1）包被有抗人IgE抗體的酶標(biāo)反應(yīng)板；（2）多種生物素化抗原。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述生物素化抗原包括生物素化的牛奶、禽蛋、蟹、蝦、花生、豆類、堅(jiān)果抗原。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述試劑盒，其特征在于：還包括酶標(biāo)記鏈霉親和素；血清標(biāo)本稀釋液；陽性對照血清；陰性對照血清；酶顯色底物；終止液；濃縮洗液。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于：鏈霉親和素為辣根過氧化物標(biāo)記的鏈霉親和素；酶顯色底物包含顯色底物A和顯色底物B，其中顯色底物A含雙氧水，顯色底物B含四甲基聯(lián)苯胺。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述酶標(biāo)反應(yīng)板為96孔聚苯乙烯酶標(biāo)反應(yīng)板。

7.權(quán)利要求2至6中任一項(xiàng)所述的試劑盒的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：（1）將抗人IgE抗體以常規(guī)手段包被至酶標(biāo)反應(yīng)板上，真空包裝；（2）配制酶標(biāo)記鏈霉親和素；（3）常規(guī)方法制備各組生物素化抗原；（4）配制血清標(biāo)本稀釋液；（5）制備陽性對照血清：篩選過敏患者血清，稀釋并加防腐劑；（6）制備陰性對照血清：篩選無過敏史，且血清總IgE低于30IU/毫升的血清，稀釋并加防腐劑；（7）將（1）至（6）中制備的試劑和常規(guī)酶聯(lián)免疫試劑盒中常用酶顯色底物、終止液和濃縮洗液裝入試劑盒內(nèi)。

8.根據(jù)權(quán)利要求2至6中任一項(xiàng)所述的試劑盒的使用方法，其特征在于：包括如下步驟：（1）準(zhǔn)備過程：①將盒中試劑和待測血清樣本平衡至室溫；②將待測血清樣本用血清樣本稀釋液稀釋；③濃縮洗液用蒸餾水稀釋備用；④根據(jù)待測血清樣本檢測要求，選擇幾種生物素化抗原，在酶標(biāo)反應(yīng)板上做好標(biāo)記；（2）檢測過程：①將選中的生物素化抗原分別加入酶標(biāo)反應(yīng)板所對應(yīng)的標(biāo)記位置，同時(shí)加入稀釋后的待檢血清；②陽性對照孔內(nèi)加入任意一種生物素化抗原和陽性對照血清稀釋液；③陰性對照孔內(nèi)加入任意一種生物素化抗原和陰性對照血清稀釋液；④將酶標(biāo)反應(yīng)板于37℃溫育，60min，取出反應(yīng)板，用稀釋后濃縮洗液對其進(jìn)行反復(fù)洗滌；⑤各反應(yīng)孔分別加入酶標(biāo)記鏈霉親和素溶液；37℃溫育，30min，取出反應(yīng)板，用稀釋后濃縮洗液對其進(jìn)行反復(fù)洗滌；⑥加入酶顯色底物，避光室溫反應(yīng)15min；再加入終止液終止顯色反應(yīng)，15min內(nèi)檢測450nm吸光度值。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒使用方法，其特征在于：陽性對照孔中加入的生物素化抗原與陽性對照血清稀釋液的加入量相等。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒使用方法，其特征在于：陰性對照孔中加入的生物素化抗原與陽性對照孔中加入的生物素化抗原的種類相同，陰性對照孔中加入的生物素化抗原與陰性對照血清稀釋液的加入量相等。