[發明專利]一種豬流行性腹瀉和大腸埃希氏菌二聯疫苗

有效

• 申請號: 201410082925.5
• 申請日: 2014-03-07
• 公開（公告）號: CN103861098A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 劉蕾;郭玉廣;申洪銀;陶曉珊;鄒桂榮;鄒敏;胡瀟;范根成;孫健
• 申請（專利權）人: 青島易邦生物工程有限公司
• 主分類號: A61K39/295
• 分類號: A61K39/295;A61K39/39;A61P1/12;A61P31/14;A61P31/04
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種豬流行性腹瀉和大腸埃希氏菌二聯疫苗，包含有抗原和疫苗佐劑，其特征在于，所述的抗原是豬流行性腹瀉病毒和大腸埃希氏菌K88、K99、987P的纖毛抗原。

2.如權利要求1所述的二聯疫苗上述的二聯疫苗，其特征在于所述的豬流行性腹瀉病毒含量≥10^6.0TCID₅₀/ml。

3.如權利要求1所述的二聯疫苗上述的二聯疫苗，其特征在于所述的豬流行性腹瀉病毒是保藏編號為CGMCC?No.8503的豬流行性腹瀉病毒SD10株。

4.如權利要求1所述的二聯疫苗上述的二聯疫苗，其特征在于所述的K88纖毛抗原含量≥100個抗原單位/ml、K99纖毛抗原含量≥50個抗原單位/ml、987P纖毛抗原含量≥50個抗原單位/ml。

5.如權利要求1所述的二聯疫苗，其特征在于所述的疫苗佐劑為氫氧化鋁膠佐劑。

6.權利要求1所述的二聯疫苗的制備方法，包括如下步驟：

（1）制備Vero細胞，生長液為含8%新生牛血清的MEM，當細胞長成單層后接種豬流行性腹瀉病毒；

（2）取豬流行性腹瀉病毒SD10株按1%接種量接種到Vero細胞單層，置37℃吸附1.5小時，加含2%新生牛血清MEM維持液繼續培養；

（3）接毒后，當細胞病變達75%以上時收獲病毒液，反復凍融3次；

（4）取凍融后的病毒液測定病毒含量，每0.1ml病毒含量不低于10^5.0TCID₅₀；

（5）將檢驗合格的細胞毒液置于滅菌容器內，加入10%福爾馬林溶液至終濃度為0.2%，37℃滅活18小時；

（6）按發酵罐容積70%（V/V）加入Minca液體培養基，同時按培養基0.1%（V/V）加入消泡劑，通入高溫蒸汽滅菌30分鐘，待培養基溫度降至35～37℃，按3%（V/V）向發酵罐中加入種子培養物，調節培養溫度至37℃，調節融氧濃度至35%，培養5～7小時分別制備含K88纖毛抗原的大腸埃希氏菌C83549菌株的菌液、含K99纖毛抗原的大腸埃希氏菌C83644菌株的菌液和含987P纖毛抗原的大腸埃希氏菌C83710菌株的菌液；

（7）各菌株發酵培養菌液經管式離心機10000r/min離心30分鐘，收獲的菌泥按0.1g/ml比例重新懸浮于生理鹽水中；采用剪切機對在58～65℃對含不同纖毛抗原的大腸埃希氏菌的菌懸液按5000～6000r/min的剪切強度剪切20～25分鐘分別進行各纖毛抗原的提取；

（8）按每1ml成品苗中，K88纖毛抗原含量≥100個抗原單位、K99纖毛抗原含量≥50個抗原單位、987P纖毛抗原含量≥50個抗原單位，配制混合纖毛液；

（9）將（5）中的病毒溶液和（8）中的混合纖毛液例混合后，與疫苗佐劑混合制備成疫苗。