[發(fā)明專利]一種HRMA檢測(cè)華支睪吸蟲、麝貓后睪吸蟲的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410081323.8
• 申請(qǐng)日: 2014-03-06
• 公開（公告）號(hào): CN103866015A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔡先全
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蔡先全
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 中山市銘洋專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 44286
• 代理人: 吳劍鋒

1.一種HRMA檢測(cè)華支睪吸蟲、麝貓后睪吸蟲的方法，其特征在于包括以下步驟：

A、根據(jù)華支睪吸蟲、麝貓后睪吸蟲COX1基因設(shè)計(jì)引物對(duì)；所述引物對(duì)的上游引物序列為：5‘-GGTAGGGTGGTTTGAGC-3’，所述引物對(duì)的下游引物序列為：5‘-TCATAGTAACCGAGCTAAA-3’；

B、提取樣本DNA后，利用設(shè)計(jì)的引物對(duì)進(jìn)行非標(biāo)記熒光PCR擴(kuò)增；

C、應(yīng)用帶HRM模塊的熒光PCR儀軟件對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行高分辨率熔解曲線分析，確定擴(kuò)增產(chǎn)物的Tm值熔解曲線圖譜。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種HRMA檢測(cè)華支睪吸蟲、麝貓后睪吸蟲的方法，其特征在于步驟B中所述非標(biāo)記熒光PCR擴(kuò)增過(guò)程是在反應(yīng)液中進(jìn)行的，其中制備20μL的反應(yīng)液由以下組分組成：

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種HRMA檢測(cè)華支睪吸蟲、麝貓后睪吸蟲的方法，其特征在于步驟B中非標(biāo)記熒光PCR擴(kuò)增的擴(kuò)增反應(yīng)按以下步驟進(jìn)行：

（1）92℃～96℃預(yù)變性30s；

（2）92℃～96℃變性10～30s,55-63℃退火10～30s,72℃10～30s,共進(jìn)行40～50個(gè)循環(huán)；

（3）72℃延伸10～30s。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種HRMA檢測(cè)華支睪吸蟲、麝貓后睪吸蟲的方法，其特征在于步驟C中對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物高分辨率熔解曲線分析，按以下步驟進(jìn)行：

（1）92℃～96℃變性1min；

（2）40℃復(fù)性1min；

（3）然后初始熔解溫度60～65℃，開始程序升溫熔解至95℃，并在熔解過(guò)程中實(shí)時(shí)檢測(cè)熒光信號(hào)，15～25次/秒。