[發(fā)明專利]一種檢測黃曲霉毒素M1的熒光微球免疫層析試紙條及方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410079913.7
• 申請(qǐng)日: 2014-03-06
• 公開（公告）號(hào): CN104897863A
• 公開（公告）日: 2015-09-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 萬宇平;馮才偉;趙正苗;何方洋;朱亮亮;馮靜;崔海峰;余厚美
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京勤邦生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/04
• 分類號(hào): G01N33/04;G01N33/577
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• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測黃曲霉毒素M1的熒光微球免疫層析試紙條，其特征在于包括由樣品結(jié)合墊、層析膜、吸水墊和底襯組成的試紙條；所述樣品結(jié)合墊上含有熒光微球標(biāo)記黃曲霉毒素M1單克隆抗體；所述層析膜上有檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)，檢測區(qū)包被有黃曲霉毒素M1半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物，質(zhì)控區(qū)包被有羊抗鼠抗抗體。所述樣品結(jié)合墊是將熒光微球抗體偶聯(lián)物以特定緩沖體系稀釋后，將樣品結(jié)合墊浸泡于稀釋緩沖液中，經(jīng)真空冷凍干燥后制備而得；所述熒光微球是內(nèi)部包埋熒光染料、表面修飾有羧基官能團(tuán)的微球懸液，熒光微球由聚苯乙烯包被，粒徑100～300nm，固體含量1%～10%，官能團(tuán)密度100～600uEq/g。

2.如權(quán)利要求1所述的檢測黃曲霉毒素M1的熒光微球免疫層析試紙條，其特征在于所述的熒光微球標(biāo)記黃曲霉毒素M1單克隆抗體是通過EDC和NHS介導(dǎo)的與蛋白表面氨基的酰胺化反應(yīng)獲得的。

3.如權(quán)利要求1所述的檢測黃曲霉毒素M1的熒光微球免疫層析試紙條，其特征在于所述的黃曲霉毒素M1半抗原是由黃曲霉毒素M1與對(duì)苯二胺反應(yīng)獲得，包括如下步驟：

65mg黃曲霉毒素M1溶于1mL?DMSO，60℃下緩慢滴加入25mg對(duì)苯二胺和0.1mL吡啶在1mL?DMSO的混合液中，滴加完畢后，繼續(xù)反應(yīng)15h，旋蒸除去溶劑，柱層析純化后得到黃曲霉毒素M1的對(duì)苯二胺單縮合物。

4.如權(quán)利要求1所述的檢測黃曲霉毒素M1的熒光微球免疫層析試紙條，其特征在于所述熒光微球標(biāo)記黃曲霉毒素M1單克隆抗體的黃曲霉毒素M1單克隆抗體是以黃曲霉毒素M1半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫原制備獲得的。

5.權(quán)利要求1所述的檢測黃曲霉毒素M1的熒光微球免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

1）制備黃曲霉毒素M1單克隆抗體；

2）制備熒光微球標(biāo)記黃曲霉毒素M1單克隆抗體，并在樣品結(jié)合墊中包埋熒光微球抗體偶聯(lián)物；

3）將樣品結(jié)合墊、層析膜、吸水墊由一端依次粘貼在底襯上組裝成試紙條；

4）切割、組裝成試紙條用于檢測黃曲霉毒素M1。

6.權(quán)利要求1所述的檢測黃曲霉毒素M1的熒光微球免疫層析試紙條用于檢測牛奶中的黃曲霉毒素M1，其特征在于包括如下步驟：

1）用權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的熒光微球免疫層析試紙條進(jìn)行檢測；

2）用熒光檢測儀分析檢測結(jié)果。