[發明專利]一種利用雙酶協同水解制備金屬螯合肽的方法

有效

• 申請號: 201410079702.3
• 申請日: 2014-03-06
• 公開（公告）號: CN103788193A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 汪少蕓;唐夢茹;何慶燕;邵彪;方衛東;趙立娜;江勇
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C12P21/06;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種金屬螯合肽，其特征在于：所述肽的氨基酸序列為：kngedg。

2.根據權利要求1所述的一種金屬螯合肽，其特征在于：所述的金屬為Ca、Fe或Zn。

3.一種如權利要求1所述的一種金屬螯合肽的制備方法，其特征在于：以海洋源魚皮、魚鱗蛋白為原料，采用復合蛋白酶及風味蛋白酶復配對其進行酶解，分離純化、冷凍干燥得到金屬螯合肽。

4.根據權利要求3所述的一種金屬螯合肽的制備方法，其特征在于：酶解條件為：底物濃度5%，酶解pH為7.0、溫度49℃、酶解時間為7小時、酶-底物重量配比為1:25；所述酶為復合蛋白酶和風味蛋白酶，兩種酶的重量復配比為復合蛋白酶：風味蛋白酶=?2:1。

5.根據權利要求3所述的一種金屬螯合肽的制備方法，其特征在于：所述分離純化的具體步驟為：酶解產物首先利用TOYOPEARL?DEAE-650M陰離子交換色譜進行分離，洗脫液為濃度梯度為含有0-0.5?M?NaCl的0.02?M、pH?9.0的磷酸緩沖液，流速為0.5?mL/min，洗脫峰在214?nm下進行測量；收集具有最高金屬螯合活性的峰，再用Sephadex?G-25凝膠過濾色譜進行分離，洗脫液為去離子水，流速為0.3?mL/min，洗脫峰在214?nm下進行測定；收集具有最高金屬螯合活性的峰，利用半制備RP-HPLC-C18反相高效液相色譜再進行進一步分離，分離條件是用體積比為0-30%乙腈溶液作為洗脫液梯度洗脫，流速為4?mL/min，收集具有最高金屬螯合活性的峰，再利用RP-HPLC-C18反相高效液相色譜再進行進一步的分離，反相HPLC的分離條件是用10-90%乙腈溶液作為梯度洗脫液，流速為1mL/min，洗脫液自含體積比為10%乙腈和90%水的混合液開始，至體積比為90%乙腈和10%水的混合液結束，進行梯度洗脫，收集體積比5%乙腈和85%水處的洗脫峰,得到金屬螯合肽。