[發明專利]一種金屬螯合肽的制備方法

有效

• 申請號: 201410078882.3
• 申請日: 2014-03-06
• 公開（公告）號: CN103880920A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 汪少蕓;黃順麗;趙立娜;邵彪;方衛東;廖蘭
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: C07K5/065
• 分類號: C07K5/065;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16;C12P21/06
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明涉及一種金屬（Ca、Fe、Zn）螯合肽，更具體地涉及了一種利用復合蛋白酶和風味蛋白酶酶解乳清蛋白制備的金屬螯合肽，屬于生物技術領域。?

背景技術

隨著乳源活性肽研究與產品開發的興起，發現乳清蛋白中含有具有免疫調節、降血壓、降血糖、降膽固醇、抗氧化、抗菌和抗病毒等生物活性的潛在肽段。乳清蛋白源生物活性肽具有極高的營養價值、食用安全性及生理保健功能，在促進機體的生長、發育和疾病防治等方面都起著重要的作用，可作為功能性食品或食品添加劑乃至藥品應用到人們日常生活中。

目前，鈣質缺乏是全球性的營養問題，我國人民由于以植物性膳食為主，缺鈣的現象更加嚴重，因此補鈣成為我國膳食營養研究中的重要課題。傳統的無機鈣鹽，如碳酸鈣、磷酸鈣、氯化鈣等，對維生素有一定破壞作用，生物學效價較低；有機鈣鹽，如檸檬酸鈣、乳酸鈣、葡萄糖鈣等，雖然鈣吸收率有所提高，但其溶解度大易溶失，且價格高。研究表明，多肽螯合鈣由于其獨特的螯合體制和轉運機制，易被吸收、安全無毒、價格低、可同時補充氨基酸和鈣，而成為補鈣首選。

微量元素鐵對人類健康特別是對嬰幼兒和兒童的生長發育有重要作用。雖然大分子蛋白質也可以與鐵離子結合，但這些大分子蛋白質本身也存在相對分子質量較大而很難通過腸黏膜的問題。而研究發現，氨基酸、多肽螯合鐵可以大大提高鐵離子的吸收率。

盡管自然界中鋅源十分豐富，但鋅在人體內的吸收代謝受種種因素的限制，鋅缺乏已成為我國及許多發展中國家的公共衛生問題。研究發現氨基酸和小肽具有促進鋅吸收的作用，而且氨基酸或肽的金屬復合體如?Fe、Zn的生物學利用率比無機鹽高且無毒副作用。因此，研究開發這種生物態鋅———蛋白酶解物螯合鋅，具有十分重要的意義。

因此，如何獲得具有金屬螯合活性的肽，就成為制備新型金屬元素補充劑迫切的研究方向。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種利用復合蛋白酶及風味蛋白酶酶解乳清蛋白制備的金屬螯合肽，使金屬（Ca、Fe、Zn）螯合活性得以高效地實現。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種金屬螯合肽，是由2個氨基酸所構成的二肽，所述肽的氨基酸序列為：fd。

所述的金屬為Ca、Fe或Zn。

一種金屬螯合肽的制備方法，以乳清蛋白為原料，采用復合蛋白酶及風味蛋白酶復配對其進行酶解，分離純化、冷凍干燥得到金屬螯合肽。

所述酶解條件為：底物濃度5%，酶解pH為7.0、溫度49℃、酶解時間為7小時、酶-底物重量配比為1:25。

所述酶為復合蛋白酶和風味蛋白酶，兩種酶的重量復配比為復合蛋白酶：風味蛋白酶=?2:1。

所述分離純化的具體步驟為：酶解產物首先利用TOYOPEARL?DEAE-650M陰離子交換色譜進行分離，洗脫液為濃度梯度為含有0-0.5?M?NaCl的0.02?mol/L?pH?9.0的磷酸緩沖液，流速為0.5?mL/min，洗脫峰在214?nm下進行測量；收集具有最高金屬螯合活性的峰，再用Sephadex?G-25凝膠過濾色譜進行分離，洗脫液為去離子水，流速為0.3?mL/min，洗脫峰在214?nm下進行測定；收集具有最高金屬螯合活性的峰，利用半制備RP-HPLC-C18反相高效液相色譜再進行進一步分離，分離條件是用體積比0-30%乙腈溶液作為洗脫液梯度洗脫，流速為4?mL/min，收集具有最高金屬螯合活性的洗脫峰，再利用分析型RP-HPLC-C18反相高效液相色譜再進行進一步分離，洗脫液為體積比0-10%乙腈溶液，流速為1?mL/min，收集洗脫峰，再采用LC/MS液質聯用質譜儀分析得出洗脫峰處為所述金屬螯合肽。

本發明立足于多肽具備與金屬離子螯合的作用位點，能夠與其形成穩定的化合物，且多肽-金屬螯合物具有獨特的螯合體制和轉運機制，易被吸收、可同時補充氨基酸和金屬的理論基礎，以來自于乳清的乳清蛋白為原材料，通過復合蛋白酶及風味蛋白酶的切割條件控制，切割制備具有高金屬（Ca、Fe、Zn）螯合活性的肽，而使金屬螯合活性得以高效地實現。本發明為乳清蛋白的應用提供了一條新思路。

附圖說明

圖1??純化乳清蛋白源金屬螯合肽的?LC/MS微陣列圖。

具體實施方式

實施例1