[發明專利]抗細菌和抗瘧原蟲抗菌肽及其制備方法

無效

• 申請號: 201410077564.5
• 申請日: 2014-03-04
• 公開（公告）號: CN103788191A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 張超;顧亞萍;何新龍;曹俊;高琪
• 申請（專利權）人: 江蘇省血吸蟲病防治研究所
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;C12N15/70
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 殷紅梅;劉海

1.一種抗細菌和抗瘧原蟲抗菌肽，其特征是：所述抗菌肽的編碼基因如SEQ?ID?No：1所示；所述抗菌肽的氨基酸序列如SEQ?ID?No：2所示。

2.一種抗細菌和抗瘧原蟲抗菌肽的制備方法，其特征是，包括以下步驟：

（1）聚合酶鏈式反應（PCR）擴增抗菌肽基因：從非洲帝王蝎毒液中提取總RNA，反轉錄獲得總cDNA；以總cDNA為模板，用上游引物和下游引物擴增得到抗菌肽基因scorpine；所述上游引物為5’-CTGCGGATCCGGCTGGATTAACGAGGAGAAG-3’，下游引物為5’-ATTACTCGAGTTAGTAGGAGAGAGGGGTGCC-3’；

（2）構建pSUMO/?scorpine表達載體：

a、純化步驟（1）得到的抗菌肽基因scorpine；

b、將pSUMO?質粒酶切、提純得到線性化的pSUMO?質粒載體；

c、將線性化的pSUMO?質粒載體和抗菌肽基因Scorpine連接，得到pSUMO/?scorpine表達載體；

（3）重組抗菌肽Scorpine蛋白表達和純化：將pSUMO/?scorpine表達載體轉化宿主菌，培養得到重組細菌，誘導、純化得到含有His-Sumo?標簽的重組抗菌肽Scorpine蛋白；

（4）重組?Scorpine?蛋白酶切：將步驟（3）純化獲得的含有?His-Sumo?標簽的重組抗菌肽Scorpine進行酶切，獲得無標簽的重組抗菌肽Scorpine。

3.如權利要求2所述的抗細菌和抗瘧原蟲抗菌肽的制備方法，其特征是：所述步驟（3）中，所述宿主菌為BL-21（DH3）pLys感受態細菌。

4.如權利要求2所述的抗細菌和抗瘧原蟲抗菌肽的制備方法，其特征是：所述步驟（3）中，重組細菌誘導的條件為：異丙基硫代-β-D-半乳糖苷濃度為0.5mM，誘導溫度為28℃，誘導時間為6h。