[發(fā)明專利]一種口服重組融合蛋白TAT-MAP30及制備方法和應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410077176.7 | 申請日： | 2014-03-05 |
| 公開（公告）號： | CN103789333A | 公開（公告）日： | 2014-05-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 孟小林;徐進(jìn)平;孟明翔;王健;潘娟 | 申請（專利權(quán)）人： | 湖北肽洋紅生物工程有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/62 | 分類號： | C12N15/62;C07K19/00;C12N1/21;C12P21/02;A61K38/16;A61K47/48;A61P31/04;A61P31/20;C12R1/19 |
| 代理公司： | 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001 | 代理人： | 王敏鋒 |
| 地址： | 436042 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 口服 重組 融合 蛋白 tat map30 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種合成的基因，其序列為SEQ?ID?NO.1所示。
2.權(quán)利要求1所述基因編碼的蛋白質(zhì)，其序列為SEQ?ID?NO.2所示。
3.含有權(quán)利要求1所述基因的基因工程菌：大腸桿菌Escherichia?coli?BL21（DE3）pET-28a-TAT-MAP30?，F(xiàn)-?ompT?hsdSB(rB-mB-)gal?dcm(DE3)；CCTCC?NO:?M2013546。
4.權(quán)利要求2所述蛋白的制備方法，其步驟為：
????1）誘導(dǎo)
?接種50ul?重組基因工程菌于20ml??Kan抗性的LB液體培養(yǎng)基中，37℃?200rpm?培養(yǎng)過夜；
?第二天，按照4%的比例，即4ml發(fā)酵液于100ml培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基中加有100ul?濃度為1mol/ml的Kan，于37℃?200rpm的條件下培養(yǎng)2小時；
?當(dāng)菌液OD600約為0.6時，取出三角瓶冰浴10分鐘，再加入20ul濃度為1mol/ml的IPTG，于18℃?200rpm的條件下誘導(dǎo)發(fā)酵20～24小時；
2）提取可溶性重組融合蛋白
?將200mL?重組基因工程菌發(fā)酵液于室溫8000rpm離心40?分鐘，收集濕菌體；
?用80mL?Lysis?Buffer重懸菌體，并將菌液轉(zhuǎn)移至破碎杯中；
?在低溫高速離心機(jī)中，以4℃?10000rmp的條件，將破碎液離心20分鐘；
?收集上清，棄掉沉淀；
經(jīng)鎳柱純化，透析，濃縮后即得一種TAT-MAP30融合蛋白，其序列為SEQ?ID?NO.2所示；
所述的重組基因工程菌為：大腸埃希氏菌Escherichia?coli?BL21（DE3）pET-28a-TAT-MAP30，F(xiàn)-?ompT?hsdSB(rB-mB-)gal?dcm(DE3)；CCTCC?NO:?M2013546。
5.權(quán)利要求1所述的基因或權(quán)利要求2所述蛋白在制備抑制金黃色葡萄糖球菌生長藥物中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求1所述的基因或權(quán)利要求2所述蛋白在制備抗對蝦白斑綜合征病毒藥物中的應(yīng)用。
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