[發(fā)明專利]一種卡貝縮宮素的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410076731.4
• 申請日: 2014-03-04
• 公開（公告）號: CN103833831A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發(fā)明（設計）人: 袁劍琳;陳超;張皓;張巍;張成廣
• 申請（專利權）人: 海南雙成藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C07K7/16
• 分類號: C07K7/16;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫

1.一種卡貝縮宮素的制備方法，其特征主要包括以下步驟：

（1）以0.5-1.1mmol/g王樹脂為載體、Fmoc保護的氨基酸為單體，依次連接Fmoc氨基酸，以Fmoc-Tyr(OMe)-OH為終止氨基酸，得到Fmoc-Tyr(OMe)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Mmt)-樹脂片段A；

（2）A經脫Fmoc后，與溴代丁酸琥珀酰亞胺酯反應得到B；B在1%-5%的TFA/DCM作用下得到C；然后C在樹脂上環(huán)化得到D；D以TFA/TIS/EDT為切肽試劑、在乙醚中沉淀形成E；

（3）以Rink?amide?AM樹脂為載體，Fmoc保護的氨基酸為單體，依次連接氨基酸，得到片段F；

（4）E與F偶聯得到G，G經裂解得到卡貝縮宮素粗品H；

（5）將粗品溶于水，經過濾后通過制備HPLC進行分離純化，得到卡貝縮宮素純品；

其中，化學物質A至H的化學結構如下所示：

。

2.根據權利要求1所述的方法，以Fmoc保護的氨基酸為單體，依次與王樹脂相連得到如式A的多肽樹脂；采用偶聯至多肽樹脂上的縮合劑為下述縮合劑的一種或多種組合：DIC、HATU、TBTU、HBTU、PyBop、HOBt、Cl-HOBt、DIPEA、NMM、DIEA。

3.根據權利要求1?所述的方法，Cys?的側鏈保護基為Mmt。

4.根據權利要求1?所述的方法，脫除Mmt保護基試劑為1%-5%TFA的DCM溶液。

5.根據權利要求1?所述的方法；H-Tyr(OMe)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Mmt)-樹脂與溴代丁酸琥珀酰亞胺酯在選自由有機溶劑DCM，NMP和DMF組成的組中的至少一種溶劑中反應得到片段B。

6.根據權利要求1?所述的方法，環(huán)化反應在樹脂上進行，所用的試劑為：二異丙基乙基胺，三乙胺，LiOH等。

7.根據權利要求1?所述的方法，采用E偶聯至F肽樹脂上的縮合劑為下述一種或多種組合：DIC、HATU、TBTU、HBTU、PyBop、HOBt、Cl-HOBt、DIPEA、NMM、DEPBT、DIEA。

8.根據權利要求1?所述的方法，以TFA/TIS/EDT為切肽試劑，其比例為90.0:5.0:5.0，最后在乙醚中沉淀得到卡貝縮宮素的粗品H。

9.根據權利要求1?所述的方法，以C18柱為填料柱，通過制備HPLC進行分離純化，流動相為硫酸銨的水溶液和乙腈的混合液，檢測波長為280mm。