[發明專利]一種乳粉中低聚果糖的高效液相色譜串聯質譜檢測方法

有效

• 申請號: 201410076222.1
• 申請日: 2014-03-04
• 公開（公告）號: CN103823006A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 高裕鋒;甄振鵬;郭劍雄;李海喬;余構彬
• 申請（專利權）人: 廣州甘蔗糖業研究所
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 廣州市一新專利商標事務所有限公司 44220
• 代理人: 唐弟

技術領域

本發明涉及乳粉中低聚果糖的定量檢測，尤其是乳粉中低聚果糖的高效液相色譜串聯質譜檢測方法。

背景技術

低聚果糖(fructo-oligosacchrides，FOS)又名蔗果低聚糖、寡果糖，是低聚糖的一種。它是由蔗糖和1～4個果糖基通過β-1,2糖苷鍵與蔗糖中的D-果糖基結合而成的蔗果三糖(GF2)，蔗果四糖(GF3)、蔗果五糖(GF4)和蔗果六糖（GF5）及其混合物的總稱。低聚果糖是一種天然活性物質，甜度為蔗糖的0.3~0.6倍。近年研究發現，低聚果糖具有良好的生理功能，如調節腸道菌群、增殖雙歧桿菌、促進鈣吸收、抗齲齒、調血脂等。低聚果糖在中國已經被國家食品藥品監督局批準為保健食品，添加在乳制品、乳酸菌飲料、固體飲料、糖果、餅干、面包、果凍、冷飲等多種食品中。

將低聚果糖添加到乳粉中是提升乳粉功能的有效方法之一。尤其是嬰幼兒乳粉，低聚果糖可以促進嬰幼兒腸蠕動，促進腸道中有益菌生長，加速腸內廢物和有害菌排出，防止腹瀉，減少便秘等?，F在國內市場上銷售的嬰幼兒乳粉大多標注添加低聚果糖，而添加“益生元”（低聚果糖）的廣告也成為各大生產企業的主要宣傳內容。顯然，低聚果糖的含量應該作為乳粉中重要的質量指標，然而目前國內并沒有完善成熟的乳粉中低聚果糖的檢測標準，這使得相關指標的監管缺失，不利于保障乳制品的質量安全。因此，開發乳粉中低聚果糖的檢測方法，并使其具備準確、高靈敏度的特點顯得意義重大。

目前國內已發布的國家標準GB/T?23528-2009《低聚果糖》，標準中涉及了低聚果糖的檢測方法，檢測乳粉中的低聚果糖也有一些文獻報道。這些方法主要利用高效液相色譜配示差檢測器或蒸發光散射檢測器達到檢測的目的，檢出限一般在1?mg/kg的數量級。然而，示差檢測器或蒸發光散射檢測器本身不能對低聚果糖進行定性，容易因為雜質干擾造成誤差，可能導致結果誤判。高效液相色譜串聯質譜法使用二級串聯的質譜作為檢測器，低聚果糖的檢出限可以達到0.01?mg/kg的數量級，檢測靈敏度可顯著提高。此外，二級質譜通過同時掃描待測化合物母離子分子離子峰和子離子分子離子峰的方式，達到針對不同低聚果糖的定性檢測，檢測準確性也顯著增強。利用高效液相色譜串聯質譜法對乳粉中低聚果糖的檢測將有效地克服現有標準和文獻方法的缺點。

發明內容

本發明的目的是提供一種乳粉中低聚果糖的高效液相色譜串聯質譜檢測方法，其克服現有技術不足，使檢測結果更準確、靈敏。

本發明的目的可通過如下技術方案來實現：

一種乳粉中低聚果糖的高效液相色譜串聯質譜檢測方法，其特征包括以下步驟：

（1）制備標準溶液并進行高效液相色譜串聯質譜檢測

稱取各種低聚果糖標準品并將其配成混合標準儲備液；再將混合標準儲備液用蒸餾水逐級稀釋，分別配成至少5種不同濃度的混合標準溶液，將不同濃度的混合標準溶液進行高效液相色譜串聯質譜檢測并得到標準譜圖，標準譜圖中保留時間確定低聚果糖品種，色譜峰面積與對應的低聚果糖濃度成函數關系。

（2）將步驟1獲得的標準譜圖按低聚果糖品種分別制作濃度與色譜峰面積關系曲線圖。

（3）乳粉樣品進行預處理及高效液相色譜串聯質譜檢測

稱取一定量的乳粉樣品，依次加入蒸餾水和乙醇，渦旋振蕩后，超聲溶解，離心，取上清液稀釋后過濾膜過濾，取濾液進行高效液相色譜串聯質譜檢測，得樣品譜圖。

（4）樣品中的各低聚果糖的含量的確定

將步驟3獲得的樣品譜圖的保留時間確定低聚果糖品種并將其色譜峰面積與步驟2對應的低聚果糖品種的標準曲線進行比對，用插入法確定樣品中的各低聚果糖的含量。

優化方案是：步驟1中的不同濃度的混合標準溶液濃度從0.5?mg/L至20?mg/L分為6級，級間間隔由小至大大致倍增，每濃度級中各低聚果糖標準品含量相同。

在步驟1和2中，高效液相色譜串聯質譜的實驗條件如下：

色譜條件：

a)??????色譜柱：XBridge?TM?Amide，3.5μm，4.6×150mm；

b)??????進樣量：5~20?μL；

c)??????柱溫：30~50℃；

d)?????流速：0.3~0.6?mL/min；

e)??????流動相和洗脫時間：

流動相A：30/70乙腈/水溶液含0.10%氨水；

流動相B：80/20乙腈/水溶液含0.10%氨水；

洗脫時間0~30?min，流動相A從100%到60%，流動相B從0%到40%；