[發明專利]一種重組質粒pET28a-hACE2及其應用在審
| 申請號： | 201410075374.X | 申請日： | 2014-03-04 |
| 公開（公告）號： | CN103898148A | 公開（公告）日： | 2014-07-02 |
| 發明（設計）人： | 牛佳;陸豪杰;方月琴;賈紅圣;顧準 | 申請（專利權）人： | 健雄職業技術學院 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N1/21;C12N9/48;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 劉燕嬌 |
| 地址： | 215411 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 重組 質粒 pet28a hace2 及其 應用 | ||
1.一種重組質粒pET28a-hACE2，其特征在于，包含載體片段pET28a和基因片段hACE2，所述載體片段pET28a來自質粒pET28a，所述基因片段hACE2來自人的Caco-2細胞。
2.一種重組菌株pET28a-hACE2/BL21(DE3)，其特征在于，包括權利要求1所述的重組質粒。
3.制備權利要求1所述的重組質粒pET28a-hACE2的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）引物設計和合成：根據ncbi報道的hACE2mRNA序列用DNAstar軟件設計針對hACE2胞外區的上下游引物；
2）總RNA的提取：收集足量的Caco-2細胞，提取總RNA；
3）采用RT-PCR擴增hACE2基因；
4）將hACE2基因與pET28a質粒片段連接得到重組質粒pET28a-hACE2。
4.權利要求2所述的重組菌株pET28a-hACE2/BL21(DE3)的制備方法，其特征在于，包括權利要求3所述的步驟1）～4），另外還包括步驟5）將步驟4）中連接得到的pET28a-hACE2克隆到大腸桿菌BL21(DE3)中，得到重組菌株pET28a-hACE2/BL21(DE3)。
5.權利要求1所述的重組質粒pET28a-hACE2在表達人截短的rhACE2蛋白方面的應用。
6.權利要求2所述的重組菌株pET28a-hACE2/BL21(DE3)在表達人截短的rhACE2蛋白方面的應用。
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