[發明專利]一種10-去乙酰基巴卡亭III的制備方法

無效

• 申請號: 201410073925.9
• 申請日: 2014-03-03
• 公開（公告）號: CN103864729A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 欒宏偉;楊凌;張輝
• 申請（專利權）人: 無錫紫熙生物科技有限公司
• 主分類號: C07D305/14
• 分類號: C07D305/14
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;楊晞

1.一種10-去乙酰基巴卡亭III的制備方法，其特征在于，包括：

（1）以7-木糖基紫杉烷為反應原料，使用硼氫化物選擇性去除7-木糖基紫杉烷的C13位側鏈；

（2）將步驟（1）所得產物使用木糖苷酶酶解以去除其C7位的木糖基，從而得10-去乙酰基巴卡亭III。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述7-木糖基紫杉烷為7-木糖-10-去乙酰紫杉醇、7-木糖-10-去乙酰紫杉醇C或7-木糖-10-去乙酰三尖杉寧堿的任意一種或幾種的混合物；

優選地，按重量百分比計，所述7-木糖基紫杉烷中，7-木糖-10-去乙酰紫杉醇、7-木糖-10-去乙酰紫杉醇C或7-木糖-10-去乙酰三尖杉寧堿的總含量為20%-100%、優選為50%-100%、更優選為70%-90%。

3.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述硼氫化物為具有RBH₄結構的任何一種化合物或幾種化合物的混合物，其中R為金屬元素或有機取代基；

優選地，所述金屬元素為Na、K、Li；

優選地，所述有機取代基為Bu₄N-、Et₄N-或Me₄N-。

4.根據權利要求1-3任一項所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，所述硼氫化物與所述7-木糖基紫杉烷摩爾比為（2-20）：1、優選為（5-10）：1、更優選為8:1；

優選地，步驟（1）的反應溶劑為四氫呋喃或甲醇；

優選地，步驟（1）的反應溫度為0-60℃、優選為20-40℃、更優選為30℃。

5.根據權利要求1-4任一項所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中，將步驟（1）所得產物用極性溶劑溶解后再加入木糖苷酶進行酶解；

優選地，所述極性溶劑為甲醇、N’,N’-二甲基甲酰胺或二甲基亞砜或其任意比例的混合物。

6.根據權利要求1-5任一項所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中所述木糖苷酶為源于Leifsonia?shinshuensis?DICP?16菌的發酵液、菌體懸浮液或菌體破碎液；

優選地，每摩爾步驟（1）所得產物加入0.2-2U、優選0.5-1U、更優選0.8U的木糖苷酶；

優選地，所述酶解反應溫度為30-35℃、優選32℃；

優選地，所述酶解反應的pH值為6-7、優選6.5；

優選地，步驟（2）還包括將酶解反應液過大孔吸附樹脂柱，然后用70%-90%乙醇解吸的步驟；進一步優選地，所述大孔吸附樹脂柱為AB-8、D101、HP20或XAD1600大孔吸附樹脂柱。

7.根據權利要求1-6任一項所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法還包括對步驟（2）所得產物進行分離純化和再結晶的步驟。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述分離純化使用硅膠層析柱進行；

優選地，所述硅膠層析柱的硅膠粒度為200-800目、優選為300-800目、更優選為300-400目；

優選地，所述硅膠層析柱的徑高比為1：（1-10）、優選為1：（2-5）、更優選為1:3；

優選地，所述硅膠層析柱的裝柱方式為干法或濕法裝柱；

優選地，步驟（2）所得產物與硅膠的質量比為1:（15-100）、優選為1：（30-60）、更優選為1:50；

優選地，使用二氯甲烷和甲醇的混合溶液作為流動相；進一步優選地，二氯甲烷與甲醇的體積比為100:3-100:10；進一步優選地，所述流動相的用量為5-15個柱體積、優選為10個柱體積。

9.根據權利要求7或8所述的制備方法，其特征在于，所述再結晶的溶劑為甲醇或乙腈。

10.根據權利要求1-9任一項所述的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）將7-木糖基紫杉烷溶解于四氫呋喃中，加入2-20倍、優選5-10倍、更優選8倍摩爾量的硼氫化物、優選硼氫化鈉，于0-60℃、優選20-40℃、更優選30℃下進行反應，反應結束后，用酸性水溶液、優選乙酸水溶液進行稀釋，然后用二氯甲烷萃取，并減壓濃縮二氯甲烷相；

（2）將步驟（1）所得產物溶解于極性溶劑、優選甲醇、N’,N’-二甲基甲酰胺或二甲基亞砜中，然后加入到木糖苷酶溶液中，每摩爾步驟（1）所得產物加入0.2-2U、優選0.5-1U、更優選0.8U的木糖苷酶；然后在pH6-7、30-35℃條件下攪拌反應，反應結束后過大孔吸附樹脂柱、優選過AB-8、D101、HP20或XAD1600大孔吸附樹脂柱，再用70%-90%乙醇解吸，蒸干解吸液；

（3）將步驟（2）所得產物采用硅膠柱層析進行分離，流動相為體積比為100:3-100:10的二氯甲烷與甲醇的混合溶液；所述流動相的用量為5-15個柱體積；收集目標餾分，并進行減壓干燥；

（4）將步驟（3）所得產物加熱溶解于甲醇中，冷卻后獲得結晶，過濾并洗滌晶體，干燥后即得10-去乙酰基巴卡亭III。