[發明專利]容易地分離的具有天然免疫球蛋白形式的雙特異性抗體

在審

• 申請號: 201410072042.6
• 申請日: 2010-06-25
• 公開（公告）號: CN103833855A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: S·戴維斯;E·史密斯;D·邁克多納德;K·L·奧森
• 申請（專利權）人: 瑞澤恩制藥公司
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46
• 代理公司: 北京商專永信知識產權代理事務所(普通合伙) 11400
• 代理人: 鄔玥;葛強

本申請是申請號為201080032565.8、申請日為2010年6月25日、發明名稱為“容易地分離的具有天然免疫球蛋白形式的雙特異性抗體”的中國發明專利申請的分案申請，原申請為國際申請號為PCT／US2010／040028的國家階段申請，該國際申請要求申請日為2009年6月26日，申請號為61／220,687的美國臨時申請的優先權。?

發明領域

本發明涉及具有重鏈異源二聚體(即相差至少一個氨基酸的兩個免疫球蛋白重鏈)的抗原結合蛋白或抗體，其允許基于免疫球蛋白重鏈和經修飾或經突變的免疫球蛋白重鏈對于親和試劑的差別親和力來進行該抗原結合蛋白質的分離。本發明還涉及抗原結合蛋白(包括雙特異性抗體)，其具有有著不同的關于A蛋白的親和力的IgG?CH2和CH3區，這允許通過所述IgG區對于A蛋白的差別結合來進行快速分離。?

背景?

抗體是多功能分子，其攜帶有獨特的對于靶抗原的結合特異性以及通過不依賴于抗原的機制與免疫系統相互作用的能力。許多目前所使用的用于癌癥的生物學治療劑是針對通常在所靶向的癌細胞上過表達的抗原的單克隆抗體。當此類抗體結合腫瘤細胞時，它們可以觸發依賴抗體的細胞毒性(ADCC)或依賴補體的細胞毒性(CDC)。不幸地，癌性細胞經常發展出抑制這些正常免疫應答的機制。?

近年來，已經進行了努力以開發出具有超過一種抗原結合特異性的抗體樣治療劑，例如雙特異性抗體。在癌癥療法的情況下，多特異性形式可以允許這樣的可能性，即使用例如，一種特異性來將該分子靶向腫瘤細胞抗原，和另一種特異性來觸發通常對于免疫系統不可用的應答。雙特異性抗體也可以用作雙組分異源二聚受體系統的替代配體，所述雙組分異源二聚受體系統通常在當其天然配體與該兩個組分結合并將該兩個組分帶到一起時而被其天然配體激活。?

在本領域中已開發了許多形式以處理由具有多種結合特異性的分子所提供的治療機會。理想地，此類分子應當是表現良好的蛋白質，其易于生產和純化，并且具有有利的體內特性，例如，適合于所希望的目的的藥物動力學，最小的免疫原性，和如果希望，常規抗體的效應子功能。?

產生雙特異性抗體的最直接的方式(在單個細胞中表達兩種不同的抗體)引起多個種類，因為各自的重鏈形成同源二聚體和異源二聚體，但是只有異源二聚體是所希望的。此外，輕鏈和重鏈可能不適當地配對。下面描述了試圖以不同的方式解決這些問題的形式的幾個實例。?

用于雙特異性T細胞募召劑(Bispecific?T?cell?Engager，BiTE)分子的一種形式(參見例如，Wolf，E.等人，(2005)Drug?Discovery?Today10：1237-1244)基于單鏈可變區片段(scFv)模塊。scFv由通過柔性連接體相融合的抗體的輕鏈和重鏈可變區構成，這樣的輕鏈和重鏈可變區通常可以合適地折疊從而這些區域可以結合關聯抗原。BiTE將兩個具有不同特異性的scFv串聯連接在單鏈上(參見圖1A)。這種構造排除了具有兩個拷貝的相同重鏈可變區的分子的產生。此外，設計連接體構造以確保各自輕鏈和重鏈的正確配對。?

BiTE形式具有幾個缺點。首先，scFv分子在其聚集傾向方面是眾人皆知的。并且，盡管據說scFv連接體的免疫原性低，但不能排除產生針對BiTE的抗體的可能性。BiTE形式中Fc部分的不存在也使得其血清半壽期非常短，并且這不得不要求頻繁的重復施用或通過泵的連?續輸注這樣的復雜化。最后，Fc的不存在也意味著由Fc介導的效應子功能的缺失，所述由Fc介導的效應子功能在某些情況下可能是有益的。?

第二種形式(圖1B)為小鼠和大鼠單克隆抗體的雜合體，并且依賴于常規的A蛋白親和層析的改進(參見例如，Lindhofer，H.等人，(1995)J.Immunol.155：219-225)。在該形式中，在同一細胞中(例如，要么作為兩個雜交瘤的四源雜交瘤(quadroma)融合物，要么在經改造的CHO細胞中)一起產生小鼠IgG2a和大鼠IgG2b抗體。由于每個抗體的輕鏈優先地與其關聯種類的重鏈相聯合，因此僅可以裝配出三種不同的抗體種類：兩種親本抗體，以及通過其Fc部分相聯合的各包含一個重鏈／輕鏈對的兩個抗體的異源二聚體。所希望的異源二聚體可以容易地從該混合物中純化出來，因為其與A蛋白的結合特性不同于親本抗體的結合特性：大鼠IgG2b不與A蛋白結合，而小鼠IgG2a結合。因此，該小鼠-大鼠異源二聚體與A蛋白結合，但在比小鼠IgG2a同源二聚體高的pH處洗脫出來，并且這使得可能選擇性地純化該雙特異性異源二聚體。與使用BiTE形式一樣，這種雜合體形式具有兩個單價抗原結合位點。?