[發明專利]一種大腸桿菌分泌表達外源蛋白的質粒載體及其構建方法有效
| 申請號： | 201410070632.5 | 申請日： | 2014-02-28 |
| 公開（公告）號： | CN103834676A | 公開（公告）日： | 2014-06-04 |
| 發明（設計）人： | 吳允昆;張蕾;孫麗芳;趙艷和;吳秀玲 | 申請（專利權）人： | 中國科學院福建物質結構研究所 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N1/21;C12N15/66;G01N27/447;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京慶峰財智知識產權代理事務所(普通合伙) 11417 | 代理人： | 劉元霞;謝蓉 |
| 地址： | 350002 *** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 大腸桿菌 分泌 表達 蛋白 質粒 載體 及其 構建 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種以PhoA信號肽引導蛋白分泌表達的大腸桿菌克隆表達質粒載體。
2.權利要求1的表達質粒載體，所述質粒載體包含Lac操縱子-PhoA引導肽-TEV識別位點-多克隆位點-多聚組氨酸肽基因序列。
3.權利要求1或2的表達質粒載體，所述質粒載體以質粒pET22b構建。
4.權利要求3的表達質粒載體，所述質粒pET22b的序列為SEQ?ID?NO.3。
5.權利要求4的表達質粒載體，所述質粒載體的序列是SEQ?ID?NO.6。
6.包含權利要求書1-5任一項所述的表達質粒載體的宿主菌，例如大腸桿菌BL21。
7.一種分泌型外源蛋白的表達質粒載體的構建方法，所述構建方法通過PCR擴增技術、限制性內切酶切割和T4連接酶連接方法，在權利要求1-6任一項的表達質粒載體的設計的多克隆位點上插入外源蛋白肽段基因序列。
8.一種分泌型外源蛋白的誘導表達方法，其中將權利要求7的構建方法構建的外源蛋白在宿主菌受到IPTG誘導后表達。
9.一種分泌型外源蛋白檢測方法，其中將權利要求8表達的外源蛋白經SDS-PAGE凝膠電泳方法檢測。
10.權利要求7-9任一項的方法，所述外源蛋白是表面免疫相關蛋白Sip蛋白；優選地，含所述表面免疫相關蛋白Sip蛋白的表達質粒載體具有SEQ?ID?NO.9的序列。
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