[發明專利]合成唾液酸化寡糖及類似物的方法

無效

• 申請號: 201410068732.4
• 申請日: 2014-02-27
• 公開（公告）號: CN103820513A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 李學兵;呂迅;陶勇;林白雪
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C07H15/10;C07H15/203
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種合成唾液酸寡糖或其類似物的方法，包括如下步驟：

1）將供體化合物、MgCl₂和丙酮酸鹽與工程菌E.coliΔnanTEK/pNA菌懸液混勻，反應，收集上清液；

2）向所述上清液中加入受體化合物、胞苷三磷酸、CMP-唾液酸合成酶和唾液酸轉移酶，混勻，反應，收集反應產物，即為唾液酸寡糖或其類似物；

所述供體化合物為N-乙酰神經氨酸或其類似物，其化學結構式如下式Ⅰ所示：

所述受體化合物的化學結構式如下式Ⅱ或式Ⅲ所示：

所述唾液酸寡糖或其類似物的化學結構式如下式Ⅳ或式Ⅴ所示：

其中R₁、R₂、R₃均選自OH、F、N₃、OAC、NH₂、SO₃H中任一種；

X1、X2均為NHAc或OH；

Y為或

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：

所述供體化合物為如下式Ⅵ-Ⅸ所示的化合物：

所述受體化合物為如下式X-XIV所示的化合物：

所述唾液酸寡糖或其類似物為如下式XV-XXIII所示的化合物：

所述E.coliΔnanTEK/pNA菌懸液為工程菌E.coliΔnanTEK/pNA懸浮在100mM、pH=7.5的Tris?HCl緩沖液中得到的溶液，且E.coliΔnanTEK/pNA在懸浮液中的OD₆₀₀為4.5-5.5；

所述E.coliΔnanTEK/pNA在懸浮液中的OD₆₀₀具體為5。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步驟1）中，所述供體化合物、所述MgCl₂、所述丙酮酸鹽和所述E.coliΔnanTEK/pNA菌懸液的加料配比為0.8-1.2mmol:0.02-0.03mmol:1.8-2.2mmol：10ml；

步驟2）中，所述上清液、所述受體化合物、所述胞苷三磷酸、所述CMP-唾液酸合成酶和所述唾液酸轉移酶的加料配比為10ml:0.75-0.85mmol：1.45-1.55mmol：1.8-2.2U：1.8-2.2U。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：

步驟1）中，所述供體化合物、所述MgCl₂、所述丙酮酸鹽和所述E.coliΔnanTEK/pNA菌懸液的加料配比為1mmol:0.025mmol:2mmol：10ml；

步驟2）中，所述上清液、所述受體化合物、所述胞苷三磷酸、所述CMP-唾液酸合成酶和所述唾液酸轉移酶的加料配比為10ml:0.8mmol：1.5mmol：2U：2U。

5.根據權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：

步驟1）中，所述反應為：35-39℃、150-250rpm震蕩反應12-16小時；

所述收集采用離心的方式，所述離心的離心力為2500-3500g；

步驟2）中，所述反應35-39℃、100-150rpm震蕩反應12-16h。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：

步驟1）中，所述反應為：37℃、200rpm震蕩反應16小時；

所述收集采用離心的方式，所述離心的離心力為3000g；

步驟2）中，所述反應37℃、120rpm震蕩反應12h。

7.根據權利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：

步驟2）中，在所述收集反應產物的步驟后還包括如下步驟：將所述反應產物經過凝膠層析純化，收集洗脫液，為唾液酸寡糖或其類似物。

8.根據權利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：

所述唾液酸轉移酶為α-2,6-唾液酸轉移酶或α-2,3-唾液酸轉移酶。

9.由權利要求1-8中任一所述的方法制備的唾液酸寡糖或其類似物。