[發明專利]一種生物素標記的川芎嗪及其制備方法

無效

• 申請號: 201410066481.6
• 申請日: 2014-02-21
• 公開（公告）號: CN103936758A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 呂斌;張奕華;劉永章;艾勇
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學
• 主分類號: C07D495/04
• 分類號: C07D495/04;A61K31/497;A61K47/48;A61P39/06;A61P43/00
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1.一種生物素標記的川芎嗪及其制備方法，生物素標記的川芎嗪，結構式為：

2.一種生物素標記的川芎嗪及其制備方法，其特征在于：所述生物素標記的川芎嗪的制備方法如下：首先將川芎嗪氧化成2-羥基-3，5，6-三甲基吡嗪，與D-生物素、EDCI，和DMAP按照12∶29∶30∶1的質量比溶解于無水DMF中，60℃條件下攪拌反應72h，TLC監測反應完全，將反應液倒入到30mL的乙醚中，4℃攪拌4h，析出白色沉淀，過濾，乙醚洗滌，粗品經柱層析純化后得生物素標記的川芎嗪，產率為78％左右。

(1)2-羥基-3，5，6-三甲基吡嗪的合成，即中間體

將6.8g，摩爾濃度為50mmoL的川芎嗪，即物質1、12mL冰醋酸和6mL質量濃度為30％的H₂O₂加入三頸瓶中，于70℃加熱反應4h后，補充加入6mL質量濃度為30％H₂O₂，繼續回流反應4h。TLC監測反應完全，冷卻至室溫，25％NaOH溶液調pH值至10，20mL×3CH₂Cl₂提取，合并有機層，用飽和食鹽水洗，然后MgSO₄干燥，過濾，蒸除得白色固體物，即中間體2。然后加入20mL醋酐，加熱回流2h，TLC監測反應完全，減壓蒸除過量醋酐，得黑色漿狀物，即中間體3。冷卻后加入25％NaOH溶液調pH值至12，20mL×3CH₂Cl₂萃取，無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，所得固體經硅膠柱層析，石油醚(V)∶乙酸乙酯(V)＝6∶1，得淡黃色結晶，2.36g質量濃度為61％的2-羥基-3，5，6-三甲基吡嗪，即中間體4；mp88-89℃；¹H?NMR，300MHz，δ4.68(d，J＝2.7Hz，2H)，4.29(s，OH)，2.51(s，6H)，2.41(s，3H).ESI-MS?m/z：153[M+H]⁺，175[M+Na]⁺；

(2)生物素標記的川芎嗪，即目標化合物的合成

將48mg，摩爾濃度為0.316mmoL的中間體4，115mg，摩爾濃度為0.471mmoL的D-生物素，120mg，摩爾濃度為0.628mmoL的EDCI，和4mg，摩爾濃度為0.032mmol的DMAP溶解到2.5mL無水DMF中，60℃條件下攪拌反應72h，TLC監測反應完全，將反應液倒入到30mL的乙醚中，4℃攪拌4h，析出白色沉淀，過濾，乙醚洗滌，粗品經柱層析，eluent：20％MeOH/EtOAc，純化后得93mg，質量濃度為78％白色固體，即生物素標記的川芎嗪終物質5。mp128-129℃；¹HNMR(300MHz)δ6.45(s，1H)，6.38(s，1H)，5.14(s，2H)，4.28-4.32(m，1H)，4.11-4.14(m，1H)，3.09(m，1H)，2.83(dd，J＝12.8Hz，4.9Hz，1H)，2.65(d，J＝14.7Hz，1H)，2.44(s，6H)，2.42(s，3H)，2.36(t，J＝7.4Hz，2H)，1.67-1.59(m，2H)，1.67-1.59(m，2H)，1.57-1.52(m，2H)，1.50-1.47(m，2H)；¹³C?NMR(75MHz)δ172.5，162.7，150.7，148.3(2×C)，144.6，64.2，61.0，59.1，55.3，33.1，27.9(3×C)，24.5，21.1，20.9，20.0；ESI-MS?m/z：379[M+H]⁺，401[M+Na]⁺，417[M+K]⁺；HRMS(EI⁺)calc.for[C₁₈H₂₆N₄O₃SNa]⁺401.1623，found401.1630。