[發明專利]一種酶法轉化海參總皂苷制備次生皂苷的方法

有效

• 申請號: 201410057554.5
• 申請日: 2014-02-20
• 公開（公告）號: CN103898186A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 林毅;林淑芳
• 申請（專利權）人: 華僑大學
• 主分類號: C12P33/20
• 分類號: C12P33/20
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭

1.一種酶法轉化海參總皂苷制備次生皂苷的方法，包括以下步驟：

a)將鮮海參去除內臟，放入沸水中煮20-30min，得到的即為海參蒸煮液；

b)海參蒸煮液調節pH至9.5-10.5，6000-10000r/min離心20-60min得到上清液；

c)上清液過AB-8型大孔樹脂柱，分別用3-4倍柱體積的去離子水和20%乙醇溶液沖洗樹脂，再用5-15倍柱體積的70%乙醇溶液進行洗脫，收集70%乙醇溶液洗脫組分；

d)減壓濃縮所收集的洗脫組分，至浸膏狀，用去離子水復溶，6000-10000r/min離心20-60min取上清，上清液經石油醚萃取脫脂，取水層再用水飽和正丁醇萃取2-4次，合并正丁醇層，減壓濃縮至浸膏狀，冷凍干燥即得海參總皂苷；

e)采用蝸牛酶酶解海參總皂苷，緩沖液為pH3.5-4.50.005-0.02μmol/L的磷酸檸檬酸緩沖液，蝸牛酶粗酶與海參總皂苷的重量比例為1：1-3，在水浴鍋中反應24-48h，用甲醇終止反應，并用0.5-2倍體積的乙醇萃取浸提12-36h；

f)減壓濃縮后，用去離子水復溶，再用水飽和正丁醇萃取2-4次，合并正丁醇層，減壓濃縮后進行冷凍干燥，即得海參次生皂苷。

2.如權利要求1所述的一種酶法轉化海參總皂苷制備次生皂苷的方法，其特征在于：所述的海參為刺參。

3.如權利要求1所述的一種酶法轉化海參總皂苷制備次生皂苷的方法，其特征在于：步驟a）加入的沸水體積為：煮20-30min后，每kg海參產生400-600ml倍蒸煮液。

4.如權利要求1所述的一種酶法轉化海參總皂苷制備次生皂苷的方法，其特征在于：步驟d）去離子水復溶時，加入的體積為浸膏體積的1-5倍。

5.如權利要求1所述的一種酶法轉化海參總皂苷制備次生皂苷的方法，其特征在于：步驟e)蝸牛酶粗酶在45℃水浴鍋中活化1h。

6.如權利要求1所述的一種酶法轉化海參總皂苷制備次生皂苷的方法，其特征在于：步驟e)水浴鍋反應溫度40-50℃。