[發明專利]一種基于多色上轉換熒光標記同時檢測三種食源性致病菌的方法

有效

• 申請號: 201410057135.1
• 申請日: 2014-02-20
• 公開（公告）號: CN103940792A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 王周平;吳世嘉;段諾;史召;方聰聰
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/533
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于多色上轉換熒光標記同時檢測三種食源性致病菌的方法，其特征在于：將三種致病菌適配體分別與三種熒光光譜可辨的上轉換熒光納米粒子偶聯形成三種熒光納米探針，同時三種致病菌適配體的互補寡核苷酸單鏈與Fe₃0₄磁性納米粒子連接，通過雙鏈雜交形成三組上轉換—磁珠納米復合物。利用980nm激光激發納米復合物，記錄此時的三組熒光發射峰強度。在檢測體系中加入三種被測致病菌，由于致病菌會優先與對應的適配體結合并改變適配體的空間構象導致互補短鏈與適配體解離，從而使部分上轉換—磁珠納米復合物分解，利用980nm激發收集得到的剩余納米復合物，同樣分別記錄三組上轉換熒光強度。在一定范圍內，被測致病菌的數量與上轉換熒光信號減小的趨勢呈正相關，對照相應的熒光發射峰建立標準曲線，以達到對三種致病菌同時定量檢測的目的。

2.如權利要求1所述的一種基于多色上轉換熒光標記同時檢測三種食源性致病菌的方法，其特征在于：用于同時檢測金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌和沙門氏菌。

3.如權利要求1所述的一種基于多色上轉換熒光標記同時檢測三種食源性致病菌的方法，其特征在于：三種熒光光譜可辨的上轉換熒光納米粒子分別為NaYF₄:Yb，Tm上轉換熒光納米粒子，NaYF₄:Yb，Ho上轉換熒光納米粒子和NaYF₄:Yb，Er/Mn上轉換熒光納米粒子。三種上轉換熒光納米粒子在980nm激發下的熒光發射峰分別在477nm、550nm和660nm處。

4.如權利要求1所述的一種基于多色上轉換熒光標記同時檢測三種食源性致病菌的方法，其特征在于：三種致病菌適配體分別與三種熒光光譜可辨的上轉換熒光納米粒子偶聯，其結合配對關系為：金黃色葡萄球菌適配體與NaYF₄:Yb，Tm上轉換熒光納米粒子偶聯，副溶血性弧菌適配體與NaYF₄:Yb，Ho上轉換熒光納米粒子偶聯，以及沙門氏菌適配體與NaYF₄:Yb，Er/Mn上轉換熒光納米粒子偶聯。