[發明專利]一種熱穩定的淀粉酶突變體及其制備方法和應用有效
| 申請號： | 201410056609.0 | 申請日： | 2014-02-19 |
| 公開（公告）號： | CN103805579A | 公開（公告）日： | 2014-05-21 |
| 發明（設計）人： | 吳敬;李祝 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N9/28 | 分類號： | C12N9/28;C12N15/70;C12R1/07 |
| 代理公司： | 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 何自剛;王玉松 |
| 地址： | 214122 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 穩定 淀粉酶 突變體 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種熱穩定的淀粉酶突變體，其特征在于，是淀粉酶的N端區域與短肽通過PT-linker連接得到的突變體；短肽氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。
2.權利要求1所述突變體，其特征在于，所述淀粉酶氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。
3.一種熱穩定的淀粉酶突變體，其特征在于，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的淀粉酶N端區域與氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的短肽通過PT-linker連接得到的突變體。
4.權利要求1-3任一所述突變體，其特征在于，所述PT-linker序列如SEQIDNO.3所示。
5.一種制備權利要求4所述淀粉酶突變的方法，其特征在于，步驟如下：
1)根據短肽和PT-linker序列，采用化學全合成的方法全合成后克隆到質粒pUC57中，構建重組質粒pUC57-P；
2)根據淀粉酶基因序列，采用化學全合成的方法全合成后克隆到質粒pET-20b(+)中，構建重組質粒pET-20b(+)-Amy；
3)將重組質粒pUC57-P中的短肽和PT-linker序列克隆到重組質粒pET-20b(+)-Amy中，構建含有短肽、PT-linker和淀粉酶片段的重組質粒pET-20b(+)-AmyP，將短肽融合到淀粉酶的N端，獲得含有突變淀粉酶序列與短肽序列融合狀態的重組載體；
4)將突變后重組載體轉化大腸桿菌BL21(DE3)，誘導表達，獲得突變體。
6.權利要求5所述制備方法，其特征在于，所述短肽氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。
7.權利要求5所述制備方法，其特征在于，所述淀粉酶氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。
8.權利要求5所述制備方法，其特征在于，所述PT-linker氨基酸序列如SEQIDNO.3所示。
9.權利要求1-3任一所述淀粉酶突變體在降解、催化淀粉性基質中的應用。
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