[發明專利]一種新型雜化納米磷酸鈣基因遞送系統及其制備方法

有效

• 申請號: 201410055627.7
• 申請日: 2014-02-19
• 公開（公告）號: CN103789348A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 孫敏捷;謝穎;張燦;平其能;張斐然
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: C12N15/87
• 分類號: C12N15/87;A61K48/00
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 王素琴

1.一種新型雜化納米磷酸鈣基因遞送系統，包括磷酸鈣及PEG接枝羧甲基殼聚糖，其特征在于，磷酸鈣包裹基因形成內核，PEG接枝羧甲基殼聚糖包覆于內核表面，PEG鏈段形成親水性外殼，從而形成具有PEG化核殼結構的納米粒子，其中所述PEG接枝羧甲基殼聚糖的粘均分子量為1～100萬，脫乙酰度大于80%，羧甲基取代度為20～90%，PEG分子量為500～10000，PEG接枝率為8%～60%，并且該納米粒子的粒徑為60～100nm。

2.如權利要求1所述的新型雜化納米磷酸鈣基因遞送系統，其特征在于，所述PEG接枝羧甲基殼聚糖的粘均分子量為10～40萬，脫乙酰度大于80%，羧甲基取代度為40～70%，PEG分子量為2000～6000，PEG接枝率為20%～40%。

3.一種制備新型雜化納米磷酸鈣基因遞送系統的方法，包括以下步驟：

1）制備試劑a，包含鈣鹽、緩沖劑，余量為水；

2）制備試劑b，包含PEG接枝羧甲基殼聚糖、磷酸鹽、氯化鈉、緩沖劑，余量為水；

3）將基因與試劑a混合，再與試劑b等體積混合均勻，

其特征在于，

在所述試劑a中，鈣鹽為CaCl₂、Ca(NO₃)₂中的一種或兩種任意比例的組合，緩沖劑為Hepes、MOPS、PBS、PIPES、Tris的一種或兩種以上的任意比例組合；

在所述b試劑中，PEG接枝羧甲基殼聚糖的粘均分子量為1～100萬，脫乙酰度大于80%，羧甲基取代度為20～90%，PEG分子量為500～10000，PEG接枝率為8%～60%；磷酸鹽包括Na₃PO₄、Na₂HPO₄、NaH₂PO₄、K₃PO₄、K₂HPO₄、KH₂PO₄、(NH4)₃PO₄、(NH4)₂HPO₄的一種或兩種以上的任意比例組合；緩沖劑為Hepes、MOPS、PBS、PIPES、Tris中的一種或兩種以上的任意比例組合。

4.如權利要求3所述的制備新型雜化納米磷酸鈣基因遞送系統的方法，其特征在于，試劑a中的鈣鹽為CaCl₂或Ca(NO₃)₂，緩沖劑為Hepes或Tris；試劑b中的PEG接枝羧甲基殼聚糖的粘均分子量為10～40萬，脫乙酰度大于80%，羧甲基取代度為40～70%，PEG分子量為2000～6000，PEG接枝率為20%～40%；磷酸鹽為Na₂HPO₄或NaH₂PO₄；緩沖劑為Hepes或Tris。

5.如權利要求3所述的制備新型雜化納米磷酸鈣基因遞送系統的方法，其特征在于，基因與試劑a混合時的基因質量（μg）與試劑a體積（mL）的比例為10～200μg/mL。

6.如權利要求5所述的制備新型雜化納米磷酸鈣基因遞送系統的方法，其特征在于，基因質量（μg）與試劑a體積（mL）的比例為40～120μg/mL。

7.如權利要求3至6中任一項所述的制備新型雜化納米磷酸鈣基因遞送系統的方法，其特征在于，所述a試劑中的鈣鹽濃度為20～1000mM，緩沖劑濃度為5～200mM，pH為6.0～10.0；所述b試劑中的PEG接枝羧甲基殼聚糖濃度為50～2000mg/L，磷酸鹽濃度為0.5～10mM，NaCl濃度為50～500mM，緩沖劑濃度為5～200mM，pH為6.0～10.0。

8.如權利要求7所述的制備新型雜化納米磷酸鈣基因遞送系統的方法，其特征在于，所述a試劑中的鈣鹽濃度為100～300mM，緩沖劑濃度為20～60mM，pH為7.0～8.0；所述b試劑中的PEG接枝羧甲基殼聚糖濃度為200～800mg/L，磷酸鹽濃度為1.5～3.0mM，NaCl濃度為100～300mM，緩沖劑濃度為20～60mM，pH為7.0～8.0。