[發(fā)明專利]一種便于形態(tài)學(xué)觀察的粘孢子蟲染色封存方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410055606.5
• 申請日: 2014-02-19
• 公開（公告）號: CN103808550A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陸宏達(dá);毛毛;竹攸汀;李振偉;盧俊;余偉楠;柴下
• 申請（專利權(quán)）人: 上海海洋大學(xué)
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01N21/00
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種便于形態(tài)學(xué)觀察的粘孢子蟲染色封存方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）粘孢子蟲懸浮液制作：從保存于福爾馬林中的患粘孢子蟲病病魚上取出孢囊放入適量蒸餾水中，弄破孢囊使得粘孢子蟲分散懸浮于蒸餾水中，粘孢子蟲懸浮液中的孢子蟲盡可能有較高濃度，一般以0.01～1×10⁶/ml為最宜；

（2）甘油蛋白粘性玻片制作：用大頭針取芝麻大小的甘油蛋白均勻涂在載玻片上，用滴管滴2～3滴粘孢子蟲懸浮液于甘油蛋白粘性玻片上，搖晃玻片使粘孢子蟲懸浮液均勻地分布于玻片上；

（3）烘片：把帶有粘孢子蟲的玻片在38～42℃干燥箱里烘干，以玻片上液體剛蒸發(fā)完為止；或者可以自然條件下晾干；

（4）染色：用滴管吸取瑞氏-姬姆薩A液（常規(guī)血細(xì)胞染色用瑞氏染液和姬姆薩1：1混合液）0.5～0.8ml覆蓋于帶有粘孢子蟲的烘干玻片上，染色5～8min；再將瑞氏-姬姆薩B液（pH=6.4～6.8的磷酸鹽緩沖液）滴加于A液上，滴加量是A液的3倍，以嘴或洗耳球吹出微風(fēng)使得液面產(chǎn)生漣漪狀而充分混合，染色8～10min；用蒸餾水緩慢細(xì)流沖掉玻片上多余的染料，直到流下的蒸餾水變?yōu)闊o色為止；

（5）脫色洗片：把染好的玻片浸入甲醇溶液中脫色洗片1～3min；

（6）脫水及封片：脫色的洗片依次經(jīng)過70%、80%、95%、100%梯度酒精分別脫水2min，然后分別經(jīng)二甲苯純酒精1：1混合液和二甲苯2min后用中性樹膠封片。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述的甘油蛋白為甘油（丙三醇）與雞蛋蛋清1:1體積比的混勻液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，所述的粘孢子蟲優(yōu)選為單極囊的武漢單極蟲（Thelohanellus?wuhanensis）和雙極囊的咽碘泡蟲（Myxobolus?pharynae）。