[發明專利]一種小鼠腸道菌群失調ERIC-PCR指紋圖譜的制備方法

無效

• 申請號: 201410055356.5
• 申請日: 2014-02-19
• 公開（公告）號: CN103773887A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 倫永志;孫麗妲
• 申請（專利權）人: 大連大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 大連智慧專利事務所 21215
• 代理人: 周志艦

1.一種小鼠腸道菌群失調ERIC-PCR指紋圖譜的制備方法，其特征在于：

(1)從盲腸內容物標本中提取基因組DNA；

(2)所提取的盲腸內容物DNA須用柱式腐殖酸清除劑清除腐殖酸，從而得到純化的DNA溶液；

(3)采用合成引物ERIC1R、ERIC2，取純化的DNA溶液作為PCR模板，PCR抑制物清除劑加入到PCR反應體系中，進行PCR擴增；取擴增產物用于非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳上樣，電泳結束后凝膠采用Syber-GreenⅠ染色，并立即進行紫外拍照，即得小鼠腸道菌群失調ERIC-PCR指紋圖譜；所述ERIC1R引物的序列為5’-ATGTAAGCTCCTGGGGATTCAC-3’，所述ERIC2引物的序列為5’-AGTAAGTGACTGGGGTGAGCG-3’；所述PCR抑制物清除劑加入量與PCR總反應體系總量的體積比1：10。

2.如權利要求1所述小鼠腸道菌群失調ERIC-PCR指紋圖譜的制備方法，其特征在于：所述非變性聚丙烯酰胺凝膠為以30%聚丙烯酰胺、5×TBE為原料，10%APS作為促凝劑，TEMED作為催化促凝劑。

3.如權利要求1所述小鼠腸道菌群失調ERIC-PCR指紋圖譜的制備方法，其特征在于：所述PCR擴增，擴增程序為：95℃預變性7min，94℃變性1min，52℃退火1min，65℃延伸8min，循環35次，65℃延伸16min。

4.權利要求1所述小鼠腸道菌群失調ERIC-PCR指紋圖譜的制備方法在小鼠腸道菌群失調快速鑒別的應用。