[發明專利]一種血液中亞硝酸鹽的檢測方法

有效

• 申請號: 201410054811.X
• 申請日: 2014-02-18
• 公開（公告）號: CN103760121B
• 公開（公告）日: 2017-07-28
• 發明（設計）人: 楊亞玲;趙嬌;寧金艷;王軍;呂云輝
• 申請（專利權）人: 云南健牛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/28;G01N1/38
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1. 一種血液中亞硝酸鹽的檢測方法，包括以下步驟：

（1）亞硝酸鹽標準工作曲線的制作

①基體空白溶液的制備：取10mL不含亞硝酸鹽的新鮮加抗凝劑血液，放入離心機中離心，取上清液5mL，加入由0.2mol/L氫氧化鈉溶液1mL和硫酸鋅1.0g組成的蛋白脫色劑，混合均勻，離心分離，取出上清液，得到幾乎無色、透明的基體空白溶液；

②分別取濃度為1.0μg/mL的NO₂^- 20、40、60、80、100μL標準溶液于微量試管中，用步驟①制備好的基體空白溶液稀釋至500μL，加入GriessA試劑25μL，混合均勻；1min后加入GriessB 試劑25μL，混合均勻，取200μL混勻顯色液于酶標板中，在酶標儀波長490nm處測定吸光度，制作工作曲線，得到亞硝酸鹽的檢測限和線性回歸方程；

（2）樣品測定

血液的檢測：取5mL新鮮加抗凝劑血液，放入離心機中離心，取上清液2mL，加入由0.2mol/L氫氧化鈉溶液0.4mL和硫酸鋅0.4g組成的蛋白沉淀脫色劑，渦旋混合均勻1min，離心分離，取出上清液500μL微量試管中，加入GriessA試劑25μL，混合均勻；1min后加入GriessB 試劑25μL，混合均勻，取200μL混勻顯色液于酶標板中，在酶標儀波長490nm處測定吸光度，并對照步驟（1）所得的線性回歸方程，計算出樣品中亞硝酸鹽的含量。

2. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述的GriessA試劑為50mg對氨基苯磺酸溶于5mL含量為0.5mol/L的鹽酸溶液；GriessB試劑為4mg 1-萘胺溶于4mL濃度為50%的甲醇溶液中。

3.權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：樣品檢測中所述的離心條件為離心時間5~10min，離心速率3000~6000r/min。