[發明專利]一種雙水相體系分離純化表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法

有效

• 申請號: 201410054314.X
• 申請日: 2014-02-18
• 公開（公告）號: CN103804336A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 霍清;楊曉芳
• 申請（專利權）人: 北京聯合大學
• 主分類號: C07D311/62
• 分類號: C07D311/62
• 代理公司: 北京北新智誠知識產權代理有限公司 11100
• 代理人: 劉秀青;熊國裕

技術領域

本發明涉及一種以普通有機溶劑與鹽水形成的雙水相體系分離純化表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，屬于生物化工領域。

背景技術

雙水相萃取技術是指親水性聚合物水溶液在一定條件下可以形成雙水相，由于被分離物在兩相中分配不同，便可實現分離。這一技術被廣泛用于生物化學、細胞生物學和生物化工等領域的產品分離和提取。雙水相萃取技術設備投資少，操作簡單，該類雙水相體系多為聚乙二醇／葡萄糖和聚乙二醇／無機鹽兩種。由于水溶性高聚物難以揮發，使反萃取必不可少，且鹽進入反萃取劑中，對隨后的分析測定帶來很大的影響。另外水溶性高聚物大多黏度較大，不易定量操作，也給后續工藝帶來麻煩。普通的能與水互溶的有機溶劑在無機鹽的存在下也可生成雙水相體系，并已用于血清銅和血漿鉻的形態分析。與水互溶的有機溶劑和鹽水相的雙水相萃取體系具有價廉、低毒、較易揮發而無需反萃取和避免使用黏稠水溶性高聚物等特點。

人們對雙水相體系中不同種類鹽分相能力及不同種類有機溶劑的分相情況進行開展研究。中國科學院化學研究所分子科學中心的王志華、馬會民等人研究了異丙醇、乙醇、丙酮等與水互溶的普通有機溶劑的雙水相體系，并考察了不同種類鹽如(NH₄)₂SO₄、Na₂CO₃、NaNO₃、Na₃PO₄·12H₂O、Na₂SO₄、K₂HPO₄·3H₂O、NaCl、NaA_c的分相能力差異(應用學，2001，18(3)：173-175)。

兒茶素是一種分布廣泛的黃酮化合物，為黃烷醇的衍生物，作為鞣質的前體，廣泛分布于于樹根、樹皮、種子和一些植物的樹葉中，特別是在茶葉中占有大量比例(占一片干燥的茶葉的10-20％)。兒茶素廣泛存在于植物茶葉中，包括表兒茶素(EC)、表沒食子兒茶素(EGC)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)和表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)4種物質，其中以表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)含量最高，活性作用最顯著，現已被列為一種潛在的抗癌藥物在中美等國被研究。近年來隨著對其組分化學結構、理化性質及生物活性研究的深入，需要提供大量高純度兒茶素作為制藥原料、標準品或生物合成品的前體物質，新的領域對產品總兒茶素含量，特別是表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)的含量提出了更高的要求。

關于提純制備EGCG的研究，主要還是以葡聚糖凝膠層析、色譜、樹脂分離為主。原理是利用兒茶素各單體之間的性質差異，選擇不同的吸脫附劑，使之得到分離。例如專利文獻CN101386614A公開了一種樹脂吸附法制備表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，利用吸附分離高分子材料對各兒茶素單體及色素吸附選擇性的不同，進行柱色譜分離，并結合膜分離技術、凝膠色譜分離技術制備高純度EGCG單體。

汪健等報道將粗制的茶多酚溶于未飽和的食鹽水中，除去沉渣，然后再加食鹽析出多酚類物質，再用乙醚抽提，冷凍干燥后可制得純品(適用技術薈萃(工業)，1998：15)。嚴明潮、羅明志研究了鹽析對兒茶素提取的影響。鹽析純化兒茶素的工藝流程為：茶多酚粗提液-鹽析-過濾-(濾液)乙酸乙酯萃取回收-濃縮-干燥-成品。該研究發現：在乙酸乙酯萃取前的茶湯中作鹽析處理，可對兒茶素制品的化學組成產生影響。在較低濃度(NaCl<5％)時，適當增加鹽濃度有利于酯溶性兒茶素(如EGCG)及兒茶素總量的提高，但達到一定的鹽濃度后，濃度的增加則不利于兒茶素純度的提高(中國茶葉，1999，(4)：29～29)。專利文獻CN1367171A公開了一種高含量EGCG兒茶素的提取方法，經過一系列惰性溶劑多步逆流萃取后，調整溶液的pH值在2.5～7.5之間，進行二價或三價金屬鹽沉淀反應，沉淀經過濾、熱水洗滌和酸溶后，用乙酸乙酯萃取，萃取的有機溶劑相進行水洗脫酸、減壓濃縮、重結晶的結晶物經過濾、冷凍雙重水洗滌，最后進行冷凍干燥。兒茶素中EGCg有效含量達90％以上，可直接用于藥物原料。

發明內容

本發明的目的在于提供一種雙水相體系分離純化表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，該方法工藝簡單、不使用有毒有機溶劑，產物純度高。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種雙水相體系分離純化表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，該方法包括以下步驟：