[發(fā)明專利]一種絲狀真菌分生孢子PCR方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410053235.7 | 申請日： | 2014-02-14 |
| 公開（公告）號： | CN103789439A | 公開（公告）日： | 2014-05-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 杜克久;宋歌;崔菲;李燕玲 | 申請（專利權(quán)）人： | 河北農(nóng)業(yè)大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 071000*** | 國省代碼： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 絲狀 真菌 分生孢子 pcr 方法 | ||
1.一種絲狀真菌分生孢子PCR方法，其特征在于，
包括以下步驟：
(1)將絲狀真菌接種于培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)；
(2)絲狀真菌培養(yǎng)物在培養(yǎng)基上長出肉眼可見分生孢子，制備分生孢子懸浮液，用于PCR擴增；
(3)1～1.5％瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增產(chǎn)物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的絲狀真菌分生孢子PCR方法，其特征在于，步驟(1)中所述培養(yǎng)基采用PDA培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為28℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的絲狀真菌分生孢子PCR方法，其特征在于，步驟(2)中所述分生孢子懸浮液的制備方法為，絲狀真菌在培養(yǎng)基上長出肉眼可見分生孢子，用無菌牙簽或無菌接種環(huán)收集分生孢子，將收集到的分生孢子轉(zhuǎn)入含有無菌水的1.5ml的離心管中，震蕩制成分生孢子懸浮液，用血球計數(shù)板計數(shù)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的絲狀真菌分生孢子PCR方法，其特征在于，步驟(2)絲狀真菌分生孢子PCR反應體系包括1×PCR緩沖液，0.2mM?dNTP混合物，1μM的上下游引物，0.4mM?MgCl2，絲狀真菌分生孢子有效濃度為105～108CFU/ml，Taq?DNA聚合酶2U，無菌水補齊至50μl，進行PCR反應。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的絲狀真菌分生孢子PCR方法，其特征在于，步驟(2)中絲狀真菌中黑曲霉分生孢子PCR擴增反應體系對其中分生孢子濃度要求嚴格，體系中黑曲霉分生孢子濃度大于108CFU/ml時，則不能擴增，其分生孢子有效濃度為105～108CFU/ml，濃度為107CFU/ml。
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