[發明專利]一種從發酵液中分離和純化非達霉素的工藝

有效

• 申請號: 201410052361.0
• 申請日: 2014-02-17
• 公開（公告）號: CN104846043B
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發明（設計）人: 胡海峰;詹陽
• 申請（專利權）人: 上海醫藥工業研究院;中國醫藥工業研究總院
• 主分類號: C07H1/06
• 分類號: C07H1/06;C07H17/08;C12P19/62;C12R1/01
• 代理公司: 上海衡方知識產權代理有限公司 31234
• 代理人: 卞孜真;曹琪

1.一種從發酵液中分離和純化非達霉素的工藝，包括以下步驟：a.將放線菌桔橙指孢囊菌Dactylosporangium aurantiacum hamdenensis亞種NRRL 18085菌株發酵，發酵結束后，用極性有機溶劑浸提菌絲體得浸提液；

b.步驟a得到的浸提液濃縮后上樣至大孔吸附樹脂柱，以有機溶劑和水的混合溶劑梯度洗脫，收集含有非達霉素的解析液；

c.步驟b得到的解析液濃縮去除水后用有機溶劑萃取，萃取液用干燥劑干燥后，減壓濃縮得濃縮物；

d.步驟c得到的濃縮物過正相柱，梯度洗脫，收集含非達霉素的洗脫液，減壓濃縮后得到非達霉素粗品；

e.步驟d得到的粗品經高壓制備液相色譜設備，用含水的極性溶劑作為流動相、并添加酸或酸性鹽調節pH，收集含有高純度非達霉素的流出液；

f.步驟e得到的流出液加水降低有機溶劑含量、過聚苯乙烯微球樹脂柱，先用水將步驟e得到流出液中調節pH的酸或酸性鹽沖洗去除后、再用極性溶劑洗脫，收集含高純度的非達霉素洗脫液，濃縮后、用乙酸乙酯萃取、萃取液干燥后濃縮，真空干燥，得白色粉末狀非達霉素純品；其中：

在步驟a中，所用極性有機溶劑選自丙酮、丙醇或甲醇；

在步驟b中，所述的大孔樹脂為非極性、弱極性、中等極性大孔樹脂；所用洗脫溶劑中的有機溶劑選自C1-C3醇或C3-C4酮，含量為0、20、30、50、60％或0、20、30、50、60、80％；

在步驟c中，萃取用有機溶劑選自乙酸乙酯或氯仿；

在步驟d中，所述正相柱填料選自硅膠或氧化鋁；所用洗脫溶劑為丙酮/非極性溶劑的混合溶劑，其中所述非極性溶劑包括石油醚或C6--C12烷烴；

在步驟e中，所述高壓制備液相色譜柱填料為非極性、弱極性或中等極性，所述洗脫用的極性溶劑選自乙腈、甲醇或乙醇，所述酸或酸性鹽選自H3PO4、NaH2PO4、NaHSO4或CH3COOH；

在步驟f中，所得的非達霉素純度在96％以上。

2.根據權利要求1所述分離和純化非達霉素的工藝，其中在步驟a中，所用極性有機溶劑為丙酮。

3.根據權利要求1所述分離和純化非達霉素的工藝，其中在步驟b中，所述的大孔樹脂的型號選自X-5、AB-8、SP825、HP-20、D101或ADS-17。

4.根據權利要求3所述分離和純化非達霉素的工藝，其中在步驟b中，所述的大孔樹脂的型號選自X-5、AB-8或D101。

5.根據權利要求1所述分離和純化非達霉素的工藝，其中在步驟b中，所用洗脫溶劑中的有機溶劑選自丙酮或甲醇。

6.根據權利要求1所述分離和純化非達霉素的工藝，其中在步驟c中，所述萃取用有機溶劑為乙酸乙酯。

7.根據權利要求1所述分離和純化非達霉素的工藝，其中在步驟d中，所述正相柱填料為氧化鋁。

8.根據權利要求l所述分離和純化非達霉素的工藝，其中在步驟e中，所述高壓制備液相色譜柱填料為硅膠鍵合碳十八硅烷，流動相為乙腈和0.1％磷酸水溶液48:52至57:43。

9.根據權利要求1所述分離和純化非達霉素的工藝，其中在步驟e中，所述流動相為乙腈和0.1％磷酸水溶液53:47至57:43。

10.根據權利要求1所述分離和純化非達霉素的工藝，其中在步驟f中，所述聚苯乙烯微球樹脂柱為聚苯乙烯微球PS-NM100或聚苯乙烯微球PS25-300。

11.根據權利要求1所述分離和純化非達霉素的工藝，其中步驟f中，所述向步驟e收集的含非達霉素流出液加水的量為收集液體積的1-3倍。