[發明專利]一種從發酵液中分離和純化非達霉素的工藝

有效

• 申請號: 201410052361.0
• 申請日: 2014-02-17
• 公開（公告）號: CN104846043B
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發明（設計）人: 胡海峰;詹陽
• 申請（專利權）人: 上海醫藥工業研究院;中國醫藥工業研究總院
• 主分類號: C07H1/06
• 分類號: C07H1/06;C07H17/08;C12P19/62;C12R1/01
• 代理公司: 上海衡方知識產權代理有限公司 31234
• 代理人: 卞孜真;曹琪

本發明提供了一種從發酵液中分離和純化非達霉素的工藝，包括：放線菌桔橙指孢囊菌Dactylosporangium aurantiacum hamdenensis亞種NRRL18085菌株發酵結束后，極性有機溶劑浸提菌絲體；浸提液濃縮后過大孔吸附樹脂柱，收集含有非達霉素的解析液；解析液濃縮后用有機溶劑萃?。惠腿∫簼饪s后經正向柱層析，得到非達霉素粗品；該粗品經高壓制備液相色譜設備，用含水的極性溶劑作為流動相、并添加酸或酸性鹽調節pH，收集含有高純度非達霉素的流出液；該洗脫液過聚苯乙烯微球樹脂柱；洗脫液濃縮、萃取、萃取液干燥后濃縮，真空干燥，得白色粉末狀非達霉素純品。通過本發明分離提純工藝，非達霉素的提取純度較高，收率高；因此既適用于實驗室研發，又適用于工業化大生產。

技術領域

本發明屬于微生物制藥領域，具體涉及一種從發酵液中分離和純化非達霉素的工藝。

背景技術

臺勾霉素是由放線菌桔橙指孢囊菌NRRL 18085產生的一系列18元大環內酯類抗生素的總稱；目前根據取代基的具體結構定義了6種(臺勾霉素A-F)。臺勾霉素B(Tiacumicin B)，也稱為非達霉素(Fidaxomicin)，其分子式為C52H74Cl2O18。

非達霉素具有抗革蘭氏陽性菌的活性，尤其是針對艱難梭菌(Clostridiumdifficile)、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)、產氣夾膜梭菌(C.perfringens)和腸球菌的抗菌效果顯著，同時還有抗腫瘤活性，對革蘭氏陰性菌的抗菌效果極弱。對于艱難梭菌感染，目前的標準治療方法為甲硝唑和萬古霉素，而采用非達霉素治療的最大優勢是降低了45%的復發率。

現有技術中，非達霉素主要通過發酵法制備：

中國專利CN103320355A公開了一種產生非達霉素的野生游動放線菌菌株，該菌株分離自采集自云南的仙鶴草樣品；并保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏名稱為游動放線菌(Actinoplanes sp.)N12WO3O4；保藏編號為CGMCC No.7043。將該游動放線菌菌株發酵后，用有機溶劑對菌絲體進行浸提、將所得浸提液濃縮去除有機溶劑得濃縮液，上樣至大孔樹脂，經梯度洗脫、萃取、蒸干得非達霉素粗品。該非達霉素粗品經Daisogel-C18 30×250mm10um制備柱，收集，減壓濃縮蒸干得非達霉素精品，含量97%，總收率60%。該專利方法的主要特征是：采用游動放線菌(Actinoplanes sp.)N12WO3O4進行發酵，再將得到的含有非達霉素的菌絲體浸提液通過大孔樹脂和C18 30×250mm10um制備柱，得到含量為97%的非達霉素精品。

中國專利CN103275152A公開了一種從非達霉素發酵菌絲體中分離純化非達霉素的工藝：采用保藏在中國普通微生物菌種保藏管理中心的保藏編號為CGMCC No.7043的游動放線菌(Actinoplanes sp.)N12WO3O4進行發酵；所得發酵液過濾、浸提，浸提液用水稀釋后通過大孔脫色樹脂脫色后、所得脫色液通過大孔吸附樹脂后吸附、梯度解析，所得解析液經濃縮、萃取、干燥后得非達霉素粗品。然后將非達霉素粗品用極性有機溶劑溶解，注入聚合物微球柱進行柱層析分離，得到非達霉素，純度95%，總收率45%。該專利方法的主要特征是：采用游動放線菌(Actinoplanes sp.)N12WO3O4進行發酵，再將得到的含有非達霉素的菌絲體浸提液通過大孔脫色樹脂進行脫色以及大孔吸附樹脂進行吸附、解析，得到非達霉素。