[發明專利]一種深海魚皮膠原多肽的制備方法

有效

• 申請號: 201410051480.4
• 申請日: 2014-02-14
• 公開（公告）號: CN103805665A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 荊仕聰
• 申請（專利權）人: 青島華科生物技術有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/14
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明屬于海洋生物酶解技術領域，具體而言，涉及一種以深海魚的魚皮膠原蛋白液為底物進行酶解制備膠原多肽的方法。

背景技術

蛋白質是人體生長發育、保持生命正常活動必不可少的物質之一。現代生物代謝研究表明，蛋白質消化后主要是以多肽的形式直接吸收。如魚皮膠原多肽不僅具有魚皮蛋白質相同的氨基酸組成，而且其消化吸收比蛋白質態更佳。某些低肽不僅能提供人體生長、發育所需的營養物質，同時還具有防病治病、調節人體生理機能的功效。有些水解多肽具有原食品蛋白或其組成氨基酸所沒有的獨特生理機能。

膠原肽的制備方法主要包括化學方法和酶法等。化學方法是利用酸或堿水解膠原蛋白，雖然方法簡單、成本低廉，但水解過程中會破壞L-型氨基酸而形成D-型氨基酸，產物復雜，蛋白質的營養損失大，并且生產過程產生的廢水多，生產周期長，不利于工業化生產。與酸法和堿法相比，酶法具有水解效率高、條件溫和、易于控制水解進程等優點，尤其最重要的一點是能對蛋白質進行定向水解而產生具有特定生物活性的肽類。另外，酶法被廣泛用來改善蛋白質的功能性質，如溶解性、乳化性、膠凝性能、起泡性、持水性和包油性等。

目前，魚皮多肽的制備都是采用酶法，按照用酶的種類多少分為單酶水解法和多酶水解法。多酶水解法又分為復合水解法和分步水解法。由于每種酶都有自己的酶切位點，因此單酶水解只能切斷有限的位點，不僅水解程度有限，而且水解產生的肽片段的端基氨基酸也是單一的。復合酶解則可以利用酶水解位點的互補作用和協同作用來提高底物的水解程度、酶解反應速度和改變端基氨基酸的類型，更有可能水解出具有某種活性的肽片段，使酶解產品具有更好的理化性質。因此，復合酶解技術是蛋白質水解技術的發展趨勢。

現有的酶解技術都是側重于控制底物濃度、溫度、pH、酶的用量等初始反應條件，然而隨著酶解反應的進行，底物濃度和pH都是變化的，導致膠原多肽酶解過程存在復雜、繁瑣、難于控制的問題，因此現有技術對反應過程中這些條件的變化很難進行有效控制，同時對苦味肽的控制也是酶解反應后采取方法脫除，沒有在反應過程中控制苦味肽的產生。

傳統工藝的脫色去腥都是采用單一活性炭，但產品的處理效果不好，需要采用其它的輔助處理工藝如雙氧水等氧化劑進行氧化脫色。因為活性炭是由不同的原料和制備工藝制成的，這樣每種活性炭都有自己的吸附特性和吸附選擇性：吸附特定的雜質和吸附作用條件：溫度、PH、溶液濃度、反應時間等，上述任何一個作用條件控制不合理都可以導致產品的處理效果不好，因此必須采用復合活性炭對產品進行處理。

另外，已有的膠原蛋白多肽產品存在著一個共同的問題是：分子量的分布不合理，而膠原肽的理化和功能性質與其分子量分布、氨基酸組成密切相關。相對平均分子量為3000的多肽產品中3000-5000道爾頓之間的分子量多肽也占一定比例，甚至5000道爾頓以上分子量的多肽也存在，500道爾頓以下的低分子量多肽比例達20%。500道爾頓以下的部分由寡肽和氨基酸組成，這部分組分的生物活性較差，且大部分是苦味肽。

發明內容

鑒于現有技術存在的問題，本發明的目的在于通過對現有工藝及其參數進行改進，從而提供一種以深海魚的魚皮膠原蛋白液為底物進行酶解制備膠原多肽的方法。該方法制備的膠原多肽產品呈乳白色、口感平淡且分子量分布合理，各種理化性質較優。

為了實現本發明的目的，發明人通過大量試驗研究和不懈探索，最終獲得了如下技術方案：

一種深海魚皮膠原多肽的制備方法，該方法包括如下步驟：

（1）取深海魚皮膠原蛋白液粗品，調節膠原蛋白液的底物濃度為5%～6%（W/V）及pH為6～8，在溫度55℃下，添加占膠原蛋白量0.5‰（W/W）的復合蛋白酶，攪拌反應0.4～0.6小時，所述的復合蛋白酶由堿性蛋白酶和木瓜蛋白酶按1:4的重量比組成，所述的堿性蛋白酶的酶活為2.4AU/g，所述的木瓜蛋白酶的酶活為60萬IU/g；

（2）在步驟（1）的酶解液中繼續加入酶活為500LAPU/g的風味蛋白酶，其添加量為膠原蛋白量的0.1‰（W/W），攪拌反應0.8～1.2小時，然后用截留分子量為3000道爾頓的超濾膜過濾，過濾時間10～20分鐘；

（3）超濾過濾后，測定過濾后溶液的濃度和pH，調節溶液的底物濃度為5%～6%（W/V）及pH為6～8，繼續反應0.4～0.6小時后再超濾一次，超濾后收集濾液；