[發(fā)明專利]一種純化特利加壓素的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410051178.9
• 申請日: 2014-02-14
• 公開（公告）號: CN103992391A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 路楊;楊東暉;周俊;周亮
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州諾泰制藥技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K7/16
• 分類號: C07K7/16;C07K1/20
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種多肽類藥物——特利加壓素的純化方法，是一種具有長效血管加壓素類似物的純化方法。?

背景技術(shù)

特利加壓素，英名為：Terlipressin，為一種環(huán)狀多肽，結(jié)構(gòu)式如下：?

化學(xué)式如下：

。

特利加壓素為人工合成的三甘氨酸-賴氨酸-加壓素，是合成的血管加壓素類似物，它是一種前體藥物，本身無活性，在體內(nèi)經(jīng)氨基肽酶作用，脫去其N末端的3個甘氨酰殘基后，緩慢“釋放”出有活性的賴氨酸加壓素，因此特利加壓素相當(dāng)于一個能以穩(wěn)定速率釋放出賴氨酸加壓素的儲藏庫。特利加壓素的主要作用是收縮內(nèi)臟血管平滑肌，減少內(nèi)臟血流量（如減少腸系膜、脾、子宮等的血流），從而減少門靜脈血流、降低門靜脈壓，同時也可作用于食道和子宮等平滑肌，是一種安全有效的治療急性靜脈曲張出血的藥物。?

中國專利CN201110171151.X公開了一種特利加壓素的制備方法，具體步驟為：先對特利加壓素粗肽溶液進(jìn)行反相色譜梯度洗脫純化，然后采用陰離子交換法將三氟醋酸鹽轉(zhuǎn)成醋酸鹽。該法總收率43%，純度為99.60?%，且不能有效分離特利加壓素與雜質(zhì)[βAsp⁸]-特利加壓素。?

現(xiàn)有特利加壓素的合成過程中，Asn水解會產(chǎn)生雜質(zhì)[Asp⁸]-特利加壓素，而[Asp⁸]-特利加壓素可以通過形成琥珀酸亞胺的中間態(tài)進(jìn)而生成雜質(zhì)[βAsp⁸]-特利加壓素，[βAsp⁸]-特利加壓素為特利加壓素已知雜質(zhì)中離主峰最近、最大的雜質(zhì)，其結(jié)構(gòu)如下：?

?。

該雜質(zhì)為毒性最大的雜質(zhì)之一，而且極其不穩(wěn)定，該雜質(zhì)的存在嚴(yán)重影響特利加壓素的含量以及使用安全。因此需要找到有效的方法將其去除并使其達(dá)到優(yōu)質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)級別0.1?%以下。本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，該雜質(zhì)用現(xiàn)有技術(shù)的手段很難除去，有些方法雖可以去除部分，但去除效果不理想，難以達(dá)到優(yōu)質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)級別同時容易造成特利加壓素本身收率降低。為此，本發(fā)明人重點研究如何去除雜質(zhì)[βAsp⁸]?特利加壓素而不影響特利加壓素的收率問題。?

本發(fā)明人用現(xiàn)有的純化方法，對用固相合成法制備的特利加壓素進(jìn)行了純化，發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)[βAsp⁸]-特利加壓素的含量均無法達(dá)到預(yù)訂目標(biāo)0.1?%。為此，本發(fā)明人對特利加壓素的純化方法進(jìn)行了研究，從而得到了本發(fā)明的技術(shù)方案。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種高收率、高純度以及低成本的特利加壓素的純化方法。本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是：選擇一種特利加壓素的純化方法，解決(1)特利加壓素成品純度不高，(2)?特利加壓素成品收率不高，(3)?特利加壓素與雜質(zhì)[βAsp⁸]-特利加壓素不能有效分離的問題。?

本發(fā)明中一些常用的縮寫及術(shù)語具有以下含義；?

Fmoc?：芴甲氧羰基

Fmoc-AA?：芴甲氧羰基保護(hù)的氨基酸

tBu?：叔丁基

HoBt?：1-羥基苯駢三唑

DIC?：N，N′-二異丙基碳化二亞胺

Gly?：甘氨酸

Lys?：?賴氨酸

Pro?：脯氨酸

Asn?：天門冬酰胺

Gln?：谷氨酰胺

Phe?：?苯丙氨酸

Tyr?：酪氨酸

Cys?：半胱氨酸

Trt?：三苯甲基

Boc?：叔丁氧羰基

DMF?：N，N′-二甲基甲酰胺

Piperidine?：六氫吡啶

TFA?：三氟醋酸

MeOH?：甲醇

DCM?：二氯甲烷。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：?

使用含表面活性劑的反相色譜法可以使特利加壓素與雜質(zhì)[βAsp⁸]-特利加壓素得到有效分離。

為此本發(fā)明提供一種特利加壓素的純化方法，其特征在于，步驟如下：?

步驟1，將特利加壓素粗品用水溶解，調(diào)節(jié)pH到3-4；

步驟2，使用含有表面活性劑的離子對流動相A沖洗C18反相填料柱；

步驟3，將步驟1溶液載入C18反相填料中；

步驟4，梯度程序為：洗脫梯度的初始狀態(tài)流動相B為5?%，保持5?min，然后60?min內(nèi)將流動相B比例增至30?%，收集部分目的峰洗脫餾分；