[發明專利]一種純化特利加壓素的方法

有效

• 申請號: 201410051178.9
• 申請日: 2014-02-14
• 公開（公告）號: CN103992391A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 路楊;楊東暉;周俊;周亮
• 申請（專利權）人: 杭州諾泰制藥技術有限公司
• 主分類號: C07K7/16
• 分類號: C07K7/16;C07K1/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種純化特利加壓素的方法，該方法使用C18反相填料，流動相采用含有表面活性劑的離子對試劑，可使成品特利加壓素中的雜質[βAsp⁸]-特利加壓素含量降低到0.1?%以下，其特征在于，所述方法包括以下步驟：?

步驟1，將特利加壓素粗品用水溶解，調節pH到3-4；

步驟2，使用含有表面活性劑的離子對流動相A沖洗C18反相填料柱；

步驟3，將步驟1溶液載入C18反相填料中；

步驟4，梯度程序為：洗脫梯度的初始狀態流動相B為5?%，保持5?min，然后60?min內將流動相B比例增至30?%，收集部分目的峰洗脫餾分；

步驟5，納濾膜脫鹽后，經過冷凍干燥得到純品特利加壓素；

其中，C18反相填料柱為（10?μm，50?mm?×250?mm)；

流動相A：5?mmol/L磷酸二氫銨+25?mmol/L?表面活性劑（使用磷酸調pH：3-4）；?

流動相B：乙腈；

梯度程序為：初始狀態流動相B為5?%，保持5?min，然后60?min內將流動相B比例增至30?%，收集部分目的峰洗脫餾分；流速為：80?mL/min；檢測波長為220?nm。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征是：包括以下步驟：

步驟1，樣品處理：

將1.00?g特利加壓素粗肽溶解于50-100?mL純凈水中，使用磷酸調節pH為3.5±0.2；

步驟2，平衡

使用含有表面活性劑的離子對流動相A沖洗C18反相填料柱5?min；

步驟3，上樣

將樣品溶液載入制備柱中；

步驟4，洗脫

梯度程序為：梯度的初始狀態流動相B為5?%，保持5?min，然后60?min內將流動相B比例增至30?%；流速為：80?mL/min；檢測波長為220?nm；收集目的峰純度大于99.80?%的洗脫餾分，中控檢測：用C18?（5?um，150×3.0mm）色譜柱；以硫酸銨緩沖液（取硫酸銨1.32?g，加水2000?mL，加硫酸0.4?mL）－甲醇（1440：320）為流動相A，硫酸銨緩沖液－甲醇（550：240）為流動相B；流速為0.6m1/min；柱溫為30?℃；檢測波長為210?nm；洗脫梯度的初始狀態為15?％流動相B，保持35?min，然后在20?min內將流動相B升至100?％，保持5?min，然后在1?min內回到初始狀態，保持19?min；

步驟5，脫鹽

將洗脫餾分經過納濾膜脫鹽，收集截留液；

步驟6，凍干

將截留液經過凍干得到純品特利加壓素。

3.如權利要求1所述的表面活性劑，其特性在于該表面活性劑為：己烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉、癸烷磺酸鈉、十二烷基磺酸鈉的中的一種，優選癸烷磺酸鈉。