[發(fā)明專利]多聚化學(xué)發(fā)光標記試劑及其制備方法與應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410050951.X
• 申請日: 2014-02-14
• 公開（公告）號: CN103792346A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉澗泉;黃炳河
• 申請（專利權(quán)）人: 赫利森（廈門）生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N21/76
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務(wù)所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及化學(xué)發(fā)光標記物，尤其是涉及多聚化學(xué)發(fā)光標記試劑及其制備方法。

背景技術(shù)

化學(xué)發(fā)光是指在化學(xué)反應(yīng)過程中產(chǎn)生可見光的一種現(xiàn)象，通常是指一些化合物在沒有紫外光或可見光照射的情況下，通過吸收化學(xué)能，從基態(tài)激發(fā)至激發(fā)態(tài)，在退激時釋放能量產(chǎn)生光子，實現(xiàn)化學(xué)能到光能裝換，從而導(dǎo)致發(fā)光的現(xiàn)象。通過測量化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的光強度，可對痕量化合物的含量進行精準定量分析。近年來發(fā)展起來的化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)(chemiluminescent?immunoassay，CLIA)是化學(xué)發(fā)光技術(shù)與免疫學(xué)方法相結(jié)合的產(chǎn)物，不但具有發(fā)光檢測的高度靈敏性，而且還具有免疫分析的高度特異性。同時，化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)不僅檢測快速、可實現(xiàn)高通量檢測，而且避免傳統(tǒng)的放射性標記試劑的使用，從而避免放射性危害，減少對環(huán)境的沖擊。化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)的檢測靈敏度是目前光學(xué)檢測中最好的技術(shù)之一，最低檢測限（LOD）可達10^-21mol／L。

目前最廣泛的化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)可分為板式化學(xué)發(fā)光和管式化學(xué)發(fā)光。板式化學(xué)發(fā)光使用抗體包被的96孔或更多孔的多孔板，通過抗體-抗原的特異性作用把檢測目標（抗原）從樣品中提取出來，加入化學(xué)發(fā)光標記的抗體后形成“三明治（sandwich）”夾心層。根據(jù)化學(xué)發(fā)光標記種類的不同，板式化學(xué)發(fā)光既可是酶促化學(xué)發(fā)光，也可是非酶促化學(xué)發(fā)光。酶促化學(xué)發(fā)光技術(shù)使用酶標記，常用的酶有辣根過氧化物酶(horse?radish?peroxidase,HRP)、堿性磷酸酶(alkaline?phosphatase,ALP)、黃嘌呤氧化酶等。其最大特點是通過酶的催化作用放大發(fā)光信號，從而提高檢測靈敏度。同時，發(fā)光過程中作為標記物的酶基本不被消耗，而反應(yīng)體系中發(fā)光底物試劑充分過量，發(fā)光信號強而穩(wěn)定，發(fā)光時間較長，可采用速率法測量。因此，酶促化學(xué)發(fā)光檢測方式簡單、成本較低、靈敏度高。非酶促化學(xué)發(fā)光技術(shù)也被稱之為直接化學(xué)發(fā)光，使用吖啶酯（acridanium?ester，AE）或異魯米諾（如aminobutylethylisoluminol，ABEI），特點是不使用生物酶、可簡化化學(xué)發(fā)光檢測過程、降低試劑成本，但在其發(fā)光過程中作為標記物的發(fā)光劑會被消耗，導(dǎo)致發(fā)光信號持續(xù)時間較短。另外，由于發(fā)光劑被很快消耗，只能進行一次性測量。

管式化學(xué)發(fā)光是最近發(fā)展起來的一種新型化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)，使用磁性或非磁性微粒作為包被載體。比起板式化學(xué)發(fā)光來說，管式化學(xué)發(fā)光有著不少優(yōu)勢，特別是使用磁性微粒的管式發(fā)光技術(shù)，在大型、全自動的診斷儀上有著廣泛的應(yīng)用。當然，管式化學(xué)發(fā)光也有其弱點，包括如何降低散射作用對檢測靈敏度的影響、如何控制磁性微粒體積分布均勻、如何保證磁性微粒-抗體共軛體的質(zhì)量、如何避免磁性微粒的聚合問題等。

國內(nèi)目前普遍使用異魯米諾（ABEI）作為直接化學(xué)發(fā)光標記，雖然異魯米諾標記很穩(wěn)定，但其發(fā)光效率不高。而相對于異魯米諾來講，吖啶酯則具有高得多的發(fā)光效率，是歐美國家所采用的直接化學(xué)發(fā)光標記物。吖啶酯標記好的蛋白或抗體曾遇到過標記物穩(wěn)定性的問題，但可通過使用合適的緩沖液來解決；這些新技術(shù)進一步擴大了吖啶酯在生命科學(xué)、特別是生物診斷領(lǐng)域的應(yīng)用。吖啶酯雖有較異魯米諾更好的化學(xué)發(fā)光特性，但在超低濃度檢測時也會遇到靈敏度不夠的問題。正是因為這種需求促使我們尋求更好的直接化學(xué)發(fā)光標記技術(shù)。

利用多聚效應(yīng)的概念來提高靈敏度或藥效是最近發(fā)展起來的一種新型生命科學(xué)技術(shù)，典型例子包括多價藥物（Polyvalent?drug）(M.Mammen,S.-K.Choi,and?G.M.Whitesides?Angew.Chem.Int.Ed.1998,37,2754-2794)和多聚辣根過氧化酶（PolyHRP）（C.A.Marquette?and?L.J.Blum?Bioanalysis,2009,1(7),1259-1269；S.Dhawan?Expert?Rev?Mol?Diagn6(5),749,2006)。前者在抗癌藥物、抗病毒藥物及其它藥物開發(fā)上別具一格，后者在提高酶免檢測靈敏度技術(shù)上應(yīng)用廣泛。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對直接化學(xué)發(fā)光生化分析（特別是酶聯(lián)免疫分析）檢測技術(shù)中面對的靈敏度問題，提供一種可提高發(fā)光效率、增強檢測靈敏度的多聚化學(xué)發(fā)光標記試劑及其制備方法。

所述多聚化學(xué)發(fā)光標記試劑的原料組成如下：

化學(xué)發(fā)光標記物（chemiluminescent?label）；

多聚物骨架（polymeric?backbone）；