[發明專利]生產L?組氨酸的方法及其專用重組菌

有效

• 申請號: 201410050868.2
• 申請日: 2014-02-14
• 公開（公告）號: CN104845923B
• 公開（公告）日: 2018-03-23
• 發明（設計）人: 溫廷益;商秀玲;張蕓;劉樹文;梁勇
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P13/24;C12R1/15
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢

1.一種構建生產L-組氨酸重組菌的方法，包括如下步驟：降低出發菌中6-磷酸葡萄糖異構酶的表達，且提高所述出發菌中6-磷酸葡萄糖脫氫酶和PRPP合成酶的表達，得到重組菌；

所述降低出發菌中6-磷酸葡萄糖異構酶的表達通過如下A）或B）方式實現：

A）失活所述出發菌染色體的pgi基因；所述失活具體為敲除；

B）將所述出發菌中的pgi基因的調控元件替換為低轉錄和低表達活性的調控元件實現；

所述提高所述出發菌中6-磷酸葡萄糖脫氫酶和PRPP合成酶的表達通過如下C）或D）方式實現：

C）增加所述出發菌中zwf-opcA基因和prsA基因的拷貝數；

D）將所述出發菌染色體上的tkt-tal-zwf-opcA-devB操縱子的啟動子替換為P_eftu啟動子，且將所述出發菌染色體上的prsA基因的啟動子替換為P_sod啟動子；所述出發菌為棒桿菌屬細菌。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述構建重組菌的方法為如下Ⅰ或Ⅱ：

Ⅰ所示的方法為敲除所述出發菌染色體的pgi基因，且增加所述出發菌中zwf-opcA基因和prsA基因的拷貝數，得到重組菌；

Ⅱ所示的方法為敲除所述出發菌染色體的pgi基因，將所述出發菌染色體上的tkt-tal-zwf-opcA-devB操縱子的啟動子替換為P_eftu啟動子、且將所述出發菌染色體上的prsA基因的啟動子替換為P_sod啟動子。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：

所述敲除為將含欲敲除基因pgi的上下游同源臂的片段導入所述出發菌中進行同源重組；

所述增加所述出發菌中zwf-opcA基因和prsA基因的拷貝數為將zwf-opcA基因和prsA-hisG^fbr片段通過重組載體導入所述出發菌；

所述將所述出發菌染色體上的tkt-tal-zwf-opcA-devB操縱子的啟動子替換為P_eftu啟動子為將含有P_eftu啟動子的片段導入所述出發菌中進行同源重組；

所述將所述出發菌染色體上的prsA基因的啟動子替換為P_sod啟動子為將含有P_sod啟動子的片段導入所述出發菌中進行同源重組。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：

所述含欲敲除基因pgi的上下游同源臂的片段的核苷酸序列為序列表中的序列1；

所述zwf-opcA基因的核苷酸序列為序列表中的序列2；

所述prsA-hisG^fbr片段的核苷酸序列為序列表中的序列3；

所述重組載體為將所述zwf-opcA基因和所述prsA-hisG^fbr片段插入表達載體得到的載體；

所述P_eftu啟動子的核苷酸序列為序列表中的序列10自5’末端第635-834位核苷酸；

所述含有P_eftu啟動子的片段的核苷酸序列為序列表中的序列10；

所述含有P_sod啟動子的片段的核苷酸序列為序列表中的序列9。