[發明專利]甜葉菊組織培養方法及其培養基

有效

• 申請號: 201410049070.6
• 申請日: 2014-02-12
• 公開（公告）號: CN103766222A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 吳衛;唐鑫;宋倫;楊昭;李興嬌;曾建威;何曉洪;陳艾萌
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

1.甜葉菊組織培養方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)外植體采集

對于室外栽培的植株，選取無病、蟲損害的甜葉菊植株，采摘植株頂端第一、二對已經完全展開，但未老熟的葉片作為外植體；

對于無菌組培苗，可使用長勢良好、健康的組培苗的所有葉片；

(2)消毒接種

采摘自室外栽培植株的葉片用流水沖洗30分鐘，在超凈工作臺上用75％酒精處理6～8秒后再用0.1％升汞浸泡8分鐘，倒去升汞溶液，用無菌水沖洗4～5次，每次不少于半分鐘，然后用無菌紙吸干表面水分并避免相互重疊，并接種到增厚誘導培養基中；

組培苗葉片可不經消毒，在無菌條件下采摘后直接接種；

接種時將完整的葉片正面接觸增厚誘導培養基表面，若接種時葉片還存有葉柄，則將葉片基部彎曲，葉柄插入增厚誘導培養基，并保持葉片接觸培養基；

(3)增厚誘導培養

葉片接種到增厚誘導培養基上后，培養至7～9天后葉片出現肉質增厚，葉片肉質增厚特征表現為，葉片增厚，表面密布透明顆粒，葉片質地脆而易斷；

(4)出芽成苗

將第(3)步所得的肉質增厚葉片轉接進入出芽成苗誘導培養基，在無菌培養室內，先完全遮光暗培養1周，再光培養1～2周后，葉片開始在中脈兩側或葉尖長出紫紅色的芽，每片葉片出芽個數約8～14個，每一個芽經繼續培養后顏色轉綠，并獨成一株再生苗，待苗生長至高3～5cm后進入下一步驟；

(5)轉接生根

將3～5cm高的苗相互分開成單株，保證每株苗有葉片5～7枚，轉接插入配置好的生根誘導培養基，生根培養約3周后，苗基部長出多條綠色根，并有明顯白色根毛后，進行下一步驟；

(6)煉苗移栽

將生根的苗連同培養容器一同移出無菌培養室，在控制溫度為正常室溫的育苗室內放置2～3天后，揭開培養容器蓋子或封口膜再放置2～3天，期間保持育苗室內濕度在80％以上，之后用清水洗凈根上附著的培養基，移栽入噴灑過多菌靈500倍液的室外土壤中，并保持土壤濕潤。

2.根據權利要求1所述的增厚誘導培養基，其特征在于：包括，MS+芐基腺嘌呤6-BA?0.1～1.0mg/L+萘乙酸NAA?0.1～0.5mg/L+0.7％瓊脂。

3.根據權利要求2所述的增厚誘導培養基，其特征在于：包括，MS+芐基腺嘌呤6-BA?0.4mg/L+萘乙酸NAA?0.1mg/L+0.7％瓊脂。

4.根據權利要求1所述的出芽成苗誘導培養基，其特征在于：包括，MS+萘乙酸NAA?0.4～1.0mg/L+芐基腺嘌呤6-BA?1.0～2.5mg/L+0.7％瓊脂。

5.根據權利要求4所述的出芽成苗誘導培養基，其特征在于：包括：MS+萘乙酸NAA?0.5mg/L+芐基腺嘌呤6-BA?2.0mg/L+0.7％瓊脂。

6.根據權利要求1所述的生根誘導培養，其特征在于：包括，1/4MS+吲哚丁酸IBA?0.05～0.2mg/L+萘乙酸NAA?0.05～0.2mg/L+0.5％瓊脂。

7.根據權利要求6所述的生根誘導培養，其特征在于：包括，1/4MS+吲哚丁酸IBA?0.2mg/L+萘乙酸NAA?0.2mg/L+0.5％瓊脂。