[發明專利]一種定點突變的Lambda噬菌體Int重組蛋白及其制備方法

有效

• 申請號: 201410046915.6
• 申請日: 2014-02-10
• 公開（公告）號: CN103740684A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 張瑋;溫華杰;李春園;蒙偉能;王文忠;施金秀
• 申請（專利權）人: 賽業（廣州）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/50
• 分類號: C12N9/50;C12N15/57;C12N15/70
• 代理公司: 暫無信息
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1.一種定點突變的Lambda噬菌體Int重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白由Lambda噬菌體Int的重組蛋白基因片段定點突變獲得。

2.根據權利要求1所述的重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白由Lambda噬菌體Int全長基因的347位和351位氨基酸突變獲得。

3.根據權利要求2所述的重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白為G347H和D351H突變的Lambda噬菌體Int重組蛋白。

4.根據權利要求3所述的重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白具有與野生型Lambda噬菌體Int蛋白酶一致的重組活性。

5.根據權利要求4所述的重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白在15℃～37℃具有酶活熱穩定性。

6.根據權利要求5所述的重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白在25℃具有酶活熱穩定性。

7.根據權利要求5所述的重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白在25℃具有溫度敏感的高生物活性。

8.一種如權利要求1至7任一項所述的重組蛋白在核酸重組系統中的應用。

9.一種如權利要求1至7任一項所述的重組蛋白通過溫度差異調控核酸重組系統中的應用。

10.一種如權利要求1至7任一項所述的定點突變的Lambda噬菌體Int重組蛋白的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）設計含有突變位點的Int特異性引物；

2）克隆野生型Lambda噬菌體Int基因；

3）以野生型Lambda噬菌體Int基因為模板，在Int特異性引物的作用下進行PCR反應，獲得定點突變的Lambda噬菌體Int重組基因；

4）采用限制性內切酶，分別酶切質粒載體和所述的Lambda噬菌體Int重組基因；

5）采用DNA連接酶進行連接反應，構建含有所述的Lambda噬菌體Int重組基因的重組質粒；

6）對步驟5）得到的重組質粒轉化大腸桿菌進行原核表達，然后通過分離、純化，得到所述重組蛋白。