[發明專利]一種制備頭孢氨芐的方法

有效

• 申請號: 201410046595.4
• 申請日: 2014-02-11
• 公開（公告）號: CN103805671A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 劉東;楊夢德;胡國剛;甘平娟;張鎖慶;魏闊;楊宏利;張文勝;劉力強;王新輝;曹歡;黃剛
• 申請（專利權）人: 華北制藥河北華民藥業有限責任公司
• 主分類號: C12P35/04
• 分類號: C12P35/04
• 代理公司: 石家莊國域專利商標事務所有限公司 13112
• 代理人: 白海靜

技術領域

本發明涉及抗生素合成技術，具體的說是一種制備頭孢氨芐的方法。?

背景技術

頭孢氨芐，英文名稱Cephalexin，是一種半合成β-內酰胺類抗生素，具有廣譜抗菌作用，對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有抗菌作用，其作用機理是通過抑制細胞壁的合成，使細胞內容物膨脹至破裂溶解，從而達到殺菌作用。?

頭孢氨芐的合成工藝主要有化學方法合成和酶法合成兩種，化學合成法是在二氯甲烷溶劑中從左旋苯甘氨酸乙基鄧鉀鹽混酐后，與經過羧基保護的7ADCA進行反應，經化學方法縮合而得到頭孢氨芐。最終每生產1kg頭孢氨芐會產生10kg以上的三廢。在這種情況下，酶法合成工藝逐漸受到更多的關注和研究。酶法合成技術是在青霉素酰化酶的催化下，通過用側鏈（即左旋苯甘氨酸衍生物，如苯甘氨酸甲(乙)酯及其鹽、苯甘氨酰胺及其鹽等）對7-ADCA進行酰化反應來生產頭孢氨芐，使側鏈與7-ADCA縮合制得頭孢氨芐。這一工藝已被專利文獻廣泛描述，如CN100368554C、CN1063491C及CN02826109.7等。與傳統的化學方法相比較，酶法合成無論從降低成本、簡化工藝，還是從環境友好等方面考慮，都具有明顯優勢。但其仍有許多不盡人意之處。如：現有酶法合成頭孢氨芐的工藝其酶縮合反應過程中存在較嚴重的酶解反應，即反應產物在酶的作用下再度逆分解成原料，由此大大影響了正反應產率。為提高酶縮合反應的產率，生產者通常是加大側鏈對母核的投料量，有的甚至過量4～6倍(摩爾比)，由此又造成側鏈過高消耗，并在產品中引入了不需要的雜質，最終導致產物純度低以及產品分離、純化困難等諸多問題。?

發明內容

本發明的目的是提供一種制備頭孢氨芐的新方法，以解決現有工藝存在側鏈投料量大、酶解反應嚴重、產品純度低、制備成本高，環境污染嚴重等問題。?

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：?

一種制備頭孢氨芐的方法，該方法是將左旋苯甘氨酸酯類衍生物與7-ADCA按照摩爾比為1.15～1.6:1的比例投料，再按照1～2倍于7-ADCA的投料量加入催化劑青霉素酰化酶進行酰化反應；其中所述的青霉素酰化酶其編碼的基因序列如SEQ?ID?NO:3所示。?

具體的，本發明的方法包括以下步驟：?

a）將左旋苯甘氨酸酯類衍生物在30～120min內緩慢加入到7-ADCA水溶液中，然后加入所?述的青霉素酰化酶，在15～25℃進行酰化反應；反應過程中PH維持在6.0～7.2；?

b）待反應終止后，過濾80～120目篩網，即得到濾物——青霉素酰化酶，濾液——頭孢氨芐混懸液；?

c）將頭孢氨芐混懸液過濾，得到頭孢氨芐粗粉。?

所述左旋苯甘氨酸酯類衍生物為左旋苯甘氨酸甲酯及其鹽、苯甘氨酸乙酯及其鹽中的任意一種。?

優選的，所述左旋苯甘氨酸酯類衍生物為左旋苯甘氨酸甲酯鹽。?

所述左旋苯甘氨酸甲酯鹽為左旋苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽或左旋苯甘氨酸甲酯硫酸鹽。?

加入到所述7-ADCA水溶液中的左旋苯甘氨酸甲酯鹽為左旋苯甘氨酸甲酯鹽固體、左旋苯甘氨酸甲酯鹽溶液或左旋苯甘氨酸甲酯鹽混懸液。?

所述7-ADCA水溶液其質量濃度為10～15%，其水溶液的溫度為15～25℃，PH為7.8～8.0。?

a）步所述酰化反應過程中，使用氨水維持PH在6.0～7.2。?

待a）步所述酰化反應的反應液出現渾濁之后，開始向反應液中緩慢加入純化水。?

具體的，所述a）步，將從開始反應至反應液開始出現渾濁的時間記為A，當反應時間為2～3×A時，開始緩慢加入純化水，并在加入純化水的過程中用HPLC法判斷反應終點。?

具體的，所加入純化水的量與反應液的體積比為0.15～0.5∶1；所述加入純化水的過程用時20～60min。?

優選的，所述左旋苯甘氨酸酯類衍生物與所述7-ADCA按照摩爾比為1.15～1.3∶1的比例投料。?

進一步的，所述c）步，用頭孢氨芐混懸液過濾后的濾液洗滌所得到的青霉素酰化酶，然后過濾80～120目篩網，得到濾物——青霉素酰化酶，濾液——頭孢氨芐混懸液，然后將頭孢氨芐混懸液再次過濾，得到頭孢氨芐粗粉；重復本步驟，收集98%以上的頭孢氨芐粗粉。?