[發明專利]一種從白色霞水母觸手中分離毒素蛋白的方法

有效

• 申請號: 201410042858.4
• 申請日: 2014-01-29
• 公開（公告）號: CN103739694A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 李鵬程;薛偉;于華華;李榮鋒;邢榮娥;劉松;秦玉坤;陳曉琳;胡林峰
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/16
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

1.一種從白色霞水母觸手中分離毒素蛋白的方法，其特征在于：

1）首先制備水母粗毒:將新鮮超低溫冷凍的白色霞水母觸手于含NaCl的預冷緩沖液中，攪拌融化，低溫離心，收集上清液，濃縮得到水母粗毒；

2）將步驟1）得到的水母粗毒經微孔濾膜過濾后，用離子色譜柱DEAESepharose?Fast?Flow分離，采用分步洗脫，流速為1-3ml/min,收集900-1080ml段的洗脫液于0～6℃下用3～10K的超濾管進行濃縮；

洗脫液為含不同濃度NaCl的pH7.0～7.4Tris-HCl；

3)將步驟2）得到的濃縮液用凝膠色譜柱SephadexG-200進行分離，以含NaCl的pH7.0～7.4Tris-HCl作為洗脫液，在0.3-0.5ml/min的流速下洗脫,收集90-120ml段的洗脫液，0～6℃下用3～10K的超濾管進行濃縮，得到毒素活性蛋白CnP45。

2.按權利要求1所述的從白色霞水母觸手中分離毒素蛋白的方法，其特征在于：

所述步驟1）白色霞水母粗毒的制備，取超低溫冷凍的白色霞水母觸手，0～6℃下加入觸手0.5～4倍重量（m/m）的含0.1～0.3mol/L?NaCl的10～30mmol/L,pH7.0～7.4Tris-HCl緩沖液，攪拌至觸手融化，0～6℃下8000～15000g離心5～20min,收集上清緩沖液，0～6℃下用3～10K的超濾管進行濃縮。

3.按權利要求1或2所述的從白色霞水母觸手中分離毒素蛋白的方法，其特征在于：

所述步驟1）觸手冷凍的溫度為－80～－20℃，冷凍時間在24h以上。

4.按權利要求1所述的從白色霞水母觸手中分離毒素蛋白的方法，其特征在于：

所述步驟2）將步驟1）所得到的粗毒濃縮液過濾所用微孔濾膜孔徑為0.45μm。

5.按權利要求1所述的從白色霞水母觸手中分離毒素蛋白的方法，其特征在于：

所述步驟2）和步驟3）的色譜柱分離均在0～6℃下進行。