[發明專利]一種能識別多種脊椎動物vigilin的單鏈抗體P33D1

有效

• 申請號: 201410041850.6
• 申請日: 2014-01-29
• 公開（公告）號: CN103820464A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 袁麗;鐘利橋;戴和平;饒瑜;李周全;張曉華
• 申請（專利權）人: 中國科學院水生生物研究所
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13;C07K16/18
• 代理公司: 武漢荊楚聯合知識產權代理有限公司 42215
• 代理人: 王健

技術領域

?本發明涉及生物技術，尤其涉及內分泌干擾物潛在生物標志物vigilin的檢測。

背景技術

卵黃蛋白原是卵生脊椎動物合成卵黃蛋白的前體，正常條件下，卵黃蛋白原只分布在性成熟雌性個體中；但當雄性個體以及幼體在受到環境中類雌激素作用時，也可以產生卵黃蛋白原，卵黃蛋白原是有效的類雌激素生物標志物，但它僅分布于卵生脊椎動物中，導致其作為生物標志物的使用受到很大的限制。Vigilin(目前還沒有中文譯文)分子量約為150?kDa，在物種間高度保守，與RNA結合發揮多種功能，它廣泛分布于真核生物當中，已有文獻報道，vigilin可以穩定卵黃蛋白原的mRNA使其不受核酸內切酶的降解，同時，vigilin也受雌激素的誘導，可能是潛在的生物標志物，能夠應用于環境監測中。抗體是檢測生物標志物的重要手段之一，目前已報道的識別vigilin的抗體有Chiu?et?al.,?High-density?lipoprotein-binding?protein?(HBP)/vigilin?is?expressed?in?human?atherosclerotic?lesions?and?colocalizes?with?apolipoprotein?E,?Arteriosclerosis?Thrombosis?and?Vascular?Biology,?1997,?17(11):?2350-2358；Dodson?et?al.,?Vigilin,?a?ubiquitous?protein?with?14?K?homology?domains,?is?the?estrogen-inducible?vitellogenin?mRNA?3'-untranslated?region-binding?protein,?The?Journal?of?Biological?Chemistry,?1997,?272(19):?12249-12252；以及Goolsby?et?al.,?RNAi-mediated?depletion?of?the?15?KH?domain?protein,?vigilin,?induces?death?of?dividing?and?non-dividing?human?cells?but?does?not?initially?inhibit?protein?synthesis,?Nucleic?Acids?Research,?2003,?31(19):5644-5653等，這些vigilin抗體都是多克隆抗體，其不足之處在于，它們只能專一地識別單種屬的vigilin。

??噬菌體展示單鏈抗體主要通過將工程化的抗體可變區基因片段插入到噬菌體外殼蛋白基因中，達到抗體可變區與噬菌體外殼蛋白融合表達并展示于噬菌體表面的目的。通過幾輪對目的抗原的淘選，目標抗體即可快速且廉價地獲得，此單鏈抗體在大腸桿菌中表達分泌，可批量制備；另外，由于不需要免疫動物，通過噬菌體展示技術獲得的單克隆抗體比多克隆抗體更加方便快捷。

發明內容

本發明的目的是提供一種能識別多種脊椎動物vigilin的單鏈抗體P33D1，該單鏈抗體P33D1通過噬菌體展示技術制備。本發明的優點在于，單鏈抗體P33D1可以特異性識別從魚類到高等哺乳動物等多種脊椎動物vigilin。本發明成本低、制備簡便、可大量制備，以單鏈抗體P33D1為分子工具，可進一步檢測潛在生物標志物vigilin的表達以及研究其功能。

為了達到上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種能識別多種脊椎動物vigilin的單鏈抗體P33D1的DNA序列為：