[發明專利]一種具有凝乳酶活性的發酵液提取物的制備方法及其產物

有效

• 申請號: 201410040762.4
• 申請日: 2014-01-27
• 公開（公告）號: CN103865842A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 杭鋒;郭本恒;劉振民;陳衛;王欽博;宋馨;吳正鈞;張灝;朱軍偉
• 申請（專利權）人: 光明乳業股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/64;A23C19/032;C12R1/01
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種具有凝乳酶活性的發酵液提取物的制備方法及其產物和應用。?

背景技術

凝乳是生產原制干酪的關鍵步驟，凝乳酶在此過程中發揮至關重要的作用，并直接關系到干酪的品質和得率。傳統干酪加工中所使用的凝乳酶（rennet）來源于未斷奶小牛的第四胃（皺胃），主要由凝乳酶（chymosin）和胃蛋白酶（pepsin）組成。商業化的小牛皺胃凝乳酶其凝乳酶所占比重在50～95%。凝乳酶介導凝乳反應涉及兩個步驟：（1）酶解酪蛋白：凝乳酶（Chymosin,E.C.3.4.23.4）對κ-CN具有高度特異性，主要水解κ-CN中的Phe₁₀₅-Met₁₀₆的肽鍵，生成由106-109殘基氨基酸組成的κ-酪蛋白巨肽（κ-casein?macropeptide）和由1-105殘基氨基酸組成的副κ-酪蛋白（para-κ-casein），凝乳酶也能夠水解α_s1-CN、α_s2-CN、β-CN；（2）當足夠的κ-CN被水解時，副κ-酪蛋白發生聚集形成三維網狀凝膠，Ca²⁺促發酪蛋白膠束聚集，進而引起酪蛋白膠束失穩并形成干酪凝塊。?

干酪加工中使用的凝乳酶的早在50多年前凝乳酶的需求已超過其產量，與此同時自1961年以來，世界干酪產量大約增加了3.5倍，小牛皺胃凝乳酶供應量確呈下降趨勢，目前，世界小牛皺胃凝乳酶的僅能滿足世界干酪產量所需凝乳酶的20～30%。小牛皺胃凝乳酶的供需矛盾和價格高昂、宗教（伊斯蘭教和猶太教）、飲食（素食主義）以及食品法規等因素，使得尋求其替代物成為乳品領域科學研究的熱點之一，尋求小牛皺胃凝乳酶替代物的研究主要動物、植物、基因重組以及微生物四個方面開展。動物和植物來源的凝乳酶主要用于特定種類的干酪，其來源和產量同樣受到限制；利用基因重組技術制備的凝乳酶具有成分單一等優點，但是，一些國家如法國、德國和荷?蘭禁止使用重組凝乳酶。?

微生物能夠產生許多種酶類，其中絕大部分分泌量很小并涉及細胞代謝過程，胞外酶能夠消化不溶的纖維素、淀粉和蛋白質大分子物質，并轉移至胞內作為細胞生長的營養物質。許多微生物，尤其是霉菌和細菌來源的胞外蛋白酶具有凝乳酶相似的性質，與植物和動物來源凝乳酶（MCEs）相比較，微生物來源的凝乳酶（MCEs）具有生產成本低、具有更加廣泛的生化多樣性以及基因改造方法簡便等優點。微生物來源凝乳酶可分為兩類：（a）來源于曲霉（Aspergillus?spp.）和根霉菌（Rhizopus?spp.）的類胃蛋白酶（pepsin-like）；（b）來源于毛霉菌（Mucorspp.）、根霉菌（Rhizomucor?spp.）和板栗疫病菌（Endothiaparasitica）的類凝乳酶（rennin-like）。目前，米黑根毛霉（Rhizomucormiehei）、微小根毛霉（Rhizomucorpusillus）和板栗疫病菌（Endotiaparasitica）三種來源的凝乳酶已用于大規模商業化生產中，已占到了全球蛋白酶市場的33%。然而，近年來微生物凝乳酶研究主要集中在芽胞桿菌屬（Bacillus），所得蛋白酶通常具有較高的蛋白酶水解活力，并具有耐熱性較強、不易滅活，導致蛋白質降解并轉化為乳清，因此，對干酪得率具有負面作用，只有部分適合于干酪生產。因此盡管部分微生物凝乳酶已產業化，篩選新型產凝乳酶的微生物菌種仍是該領域的重要研究工作。?

發明內容

因此，本發明要解決的技術問題就是針對目前存在的凝乳酶來源和產量嚴重不足的技術問題，提供了一種具有凝乳酶活性的發酵液提取物的制備方法及其產物和應用。?

為解決上述技術問題，本發明采取的技術方案之一是：一種具有凝乳酶活性的發酵液提取物的制備方法，其所述制備方法包括以下步驟：利用小麥麩皮培養基培養類芽孢桿菌（Paenibacillus?damxungensis?sp.nov.）CGMCC?No.8333，15℃～40℃，震蕩培養18～120小時得到發酵液，將所得發酵液離心后取上清液即得。?

本發明所述小麥麩皮培養基包括小麥麩皮和水。其中所述的小麥麩皮為本領域常規的小麥麩皮，所述小麥麩皮的來源較佳地包括：山東、河南和江蘇，優選的來源為山東。?