[發(fā)明專利]一種從蛹蟲草中提取抗腫瘤活性組分的方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410040147.3
• 申請(qǐng)日: 2014-01-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103784481A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張耀洲;陳玉嬌;崔今松;陳劍清;舒特俊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 正源堂（天津）生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A61K36/068
• 分類號(hào): A61K36/068;A61P35/00
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33228
• 代理人: 沈亞芳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物制品加工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從蛹蟲草中提取抗腫瘤活性組分的方法，以及該活性組分在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

腫瘤是一種基因病，但并非是遺傳的，它是指細(xì)胞在致癌因素作用下，基因發(fā)生了改變，失去對(duì)其生長(zhǎng)的正常調(diào)控，導(dǎo)致單克隆性異常增生而形成的新生物。2008年，WHO發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，中國(guó)已經(jīng)成為世界第二大癌癥高發(fā)國(guó)，中國(guó)每年新增220萬(wàn)名癌癥患者，約占全球癌癥病人總數(shù)的20%，尤其是肝癌、胃癌和肺癌成為主要的健康殺手。研究如何消滅癌癥、讓癌癥病人能生活地更好，是醫(yī)藥領(lǐng)域中的研究重點(diǎn)，因此尋找高效、低毒、選擇性強(qiáng)的有臨床應(yīng)用價(jià)值的理想的新型抗腫瘤藥物是一項(xiàng)長(zhǎng)期而艱巨的任務(wù)，從藥食兩用的無(wú)毒且原料廉價(jià)易得的中藥里尋找抗腫瘤藥物已成為抗腫瘤藥物開(kāi)發(fā)的重要方向與希望所在。

冬蟲夏草是蟲草菌寄生在鱗翅目蝙蝠蛾科幼蟲中以其為載體的蟲菌復(fù)合體，含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、蟲草酸、核苷類物質(zhì)和多種氨基酸等活性物質(zhì)，味道清香，具有滋肺益氣、增精補(bǔ)腎、止血化痰、抑制腫瘤、止咳鎮(zhèn)靜、驅(qū)風(fēng)、散熱、駐容美顏、延緩衰老、提高機(jī)體免疫力之功效。

蛹蟲草(Cordycepsmilitaris)，在分類學(xué)上與冬蟲夏草同歸于蟲草屬,是一種珍貴的藥用真菌，其化學(xué)成分和藥理作用與冬蟲夏草相似，在臨床上常替代冬蟲夏草入藥。由于野生蛹蟲草資源極為有限，不能滿足日益增加的市場(chǎng)需求，人工栽培蛹蟲草成為必需。目前，人工栽培蛹蟲草已獲成功，并實(shí)現(xiàn)了規(guī)?；a(chǎn)。

蛹蟲草具有多種與抗腫瘤作用相關(guān)的活性物質(zhì)，有些活性物質(zhì)如蟲草素、蟲草多糖等的抗腫瘤作用已研究得比較深入；而有些活性物質(zhì)如類胡蘿卜素、蛋白質(zhì)等在抗腫瘤方面的研究則較少。蛹蟲草活性物質(zhì)未能最大程度地得到開(kāi)發(fā)與利用，所以研究具有抗腫瘤作用的新的活性物質(zhì)，不斷開(kāi)拓現(xiàn)有活性物質(zhì)的新的生理活性和藥理作用具有重要意義，能為進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)蛹蟲草在醫(yī)藥方面的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和產(chǎn)業(yè)化背景。

傳統(tǒng)的蛹蟲草抗腫瘤活性組分的提取方法，如杜秀菊等發(fā)表的“蛹蟲草抗腫瘤和免疫活性部位的體外篩選”（食用菌學(xué)報(bào).2011.18(1):41-45）中公開(kāi)了一種蛹蟲草子實(shí)體提取物制備方法：蛹蟲草子實(shí)體粉過(guò)60目篩后，用氯仿提取2小時(shí)，過(guò)濾，濾渣風(fēng)干后用乙酸乙酯提取2小時(shí)，過(guò)濾，濾渣風(fēng)干后用95%乙醇提取2小時(shí)，過(guò)濾，濾渣風(fēng)干后用30倍100℃蒸餾水提取2小時(shí)，400g離心20min后沉淀用15倍100℃3%草酸銨溶液提取2小時(shí)，400g離心20min后沉淀用10倍100℃5%NaOH溶液提取2小時(shí)，400g離心20min后上清液繼續(xù)用1mol/L鹽酸4℃中和，400g離心20min，對(duì)各步得到的濾液或上清液真空濃縮，冷凍干燥，得到各提取物組分。該蛹蟲草子實(shí)體有效成分的提取分離方法步驟繁雜，而且提取出的活性成分少。另外，采用這種傳統(tǒng)的溶劑萃取法進(jìn)行有效活性組分的提取，批次之間不具有重復(fù)性，即無(wú)法保證第一批萃取得到的物質(zhì)組分與第二批萃取得到的物質(zhì)組分之間的一致性。

又如朱麗娜等發(fā)表的“蛹蟲草子實(shí)體中N6-（2-羥乙基）-腺苷的分離純化及抗腫瘤作用”（食用菌學(xué)報(bào).2013.20(1):62-65）中公開(kāi)了一種目標(biāo)化合物的分離純化方法，它將蛹蟲草子實(shí)體粉末加入蒸餾水中100℃提取2小時(shí)，重復(fù)提取2次，合并提取液，然后以該提取液進(jìn)行后續(xù)目標(biāo)成分的提取。該方法屬于傳統(tǒng)的中藥有效成分的提取方法，即以水提的上清進(jìn)行有效成分的提取，而對(duì)水提的沉淀卻沒(méi)有進(jìn)行深入的研究，這有可能導(dǎo)致大量活性組分的丟失，從而阻礙了蛹蟲草在抗腫瘤藥物開(kāi)發(fā)方面的進(jìn)展。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，突破現(xiàn)有中藥有效組分提取的限制，提供一種從蛹蟲草中提取抗腫瘤活性組分的方法，該方法以在細(xì)胞水平上沒(méi)有抗腫瘤活性的蛹蟲草子實(shí)體水提沉淀為原料，經(jīng)丙酮浸提后再用制備液相色譜技術(shù)活性導(dǎo)向分離出強(qiáng)活性抗腫瘤活性組分。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：

一種從蛹蟲草中提取抗腫瘤活性組分的方法，該方法包括以下步驟：

1、超低溫粉碎：

取烘干的蛹蟲草子實(shí)體為原料，放入超微粉碎機(jī)中進(jìn)行超微粉碎，同時(shí)粉碎全過(guò)程用2～10℃的水作為超微破碎機(jī)內(nèi)部冷卻液，超微粉碎時(shí)間為5-20min，得到超微粉。

上述粉碎時(shí)間優(yōu)選為12min。

2、溶劑提?。?/p>

2.1水煮：在超微粉中加入超純水，超純水的加入量為超微粉質(zhì)量的8～10倍，100℃加熱3～10小時(shí)進(jìn)行提取，離心取沉淀，然后重復(fù)1～3次，將得到的沉淀合并，干燥，得到粗品A。