[發明專利]一種從蛹蟲草中提取抗腫瘤活性組分的方法及其應用

有效

• 申請號: 201410040147.3
• 申請日: 2014-01-27
• 公開（公告）號: CN103784481A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 張耀洲;陳玉嬌;崔今松;陳劍清;舒特俊
• 申請（專利權）人: 正源堂（天津）生物科技有限公司
• 主分類號: A61K36/068
• 分類號: A61K36/068;A61P35/00
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務所(普通合伙) 33228
• 代理人: 沈亞芳

1.一種從蛹蟲草中提取抗腫瘤活性組分的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）超低溫粉碎：

取烘干的蛹蟲草子實體為原料，放入超微粉碎機中進行超微粉碎，同時粉碎全過程用2～10℃的水作為超微破碎機內部冷卻液，超微粉碎時間為5-20min，得到超微粉；

（2）溶劑提?。?/p>

水煮：在超微粉中加入超純水，超純水的加入量為超微粉質量的8～10倍，100℃加熱3～10小時進行提取，離心取沉淀，然后重復1～3次，將得到的沉淀合并，干燥，得到粗品A；

丙酮沉淀：在粗品A中加入丙酮，丙酮的加入量為粗品A質量的2～4倍，室溫下浸提12～36小時，離心后取沉淀，然后重復1～3次，將得到的沉淀合并，干燥，得到粗品B；

（3）色譜分離：

（a）取粗品B用50%乙酸乙酯-正己烷溶液溶解至濃度為50mg/ml，然后通過制備液相色譜進行分離，洗脫方式為100%正己烷等度洗脫，25%乙酸乙酯-正己烷溶液等度洗脫，100%乙酸乙酯等度洗脫，檢測波長為260nm，得到各組分經體外抗腫瘤活性篩選后，選取活性最強的組分旋蒸濃縮后真空干燥，得到組分A；

（b）取組分A用100%乙酸乙酯溶解至濃度為50mg/ml，然后通過制備液相色譜進行分離，洗脫方式為100%正己烷等度洗脫，10%乙酸乙酯-正己烷溶液等度洗脫，15%乙酸乙酯-正己烷溶液等度洗脫，30%乙酸乙酯-正己烷溶液等度洗脫，60%乙酸乙酯-正己烷溶液等度洗脫，100%甲醇等度洗脫，檢測波長為260nm，得到各組分經體外抗腫瘤活性篩選后，選取活性最強的組分旋蒸濃縮后真空干燥，得到組分B；

（c）取組分B用100%甲醇溶解至濃度為50mg/ml，然后通過制備液相色譜進行分離，洗脫方式為100%乙酸乙酯～100%甲醇梯度洗脫，檢測波長為260nm，得到各組分經體外抗腫瘤活性篩選后，選取活性最強的組分旋蒸濃縮后真空干燥，得到組分C；

（d）取組分C用20%二氯甲烷-正己烷溶液溶解至濃度為50mg/ml，然后通過制備液相色譜進行分離，洗脫方式為100%正己烷等度洗脫，20%二氯甲烷-正己烷溶液等度洗脫，25%二氯甲烷-正己烷溶液等度洗脫，檢測波長為260nm，得到各組分經體外抗腫瘤活性篩選后，選取活性最強的組分，旋蒸濃縮后真空干燥，即為本發明目的抗腫瘤活性組分。

2.根據權利要求1所述的一種從蛹蟲草中提取抗腫瘤活性組分的方法，其特征在于：所述步驟（1）中粉碎時間為12min。

3.根據權利要求1所述的一種從蛹蟲草中提取抗腫瘤活性組分的方法，其特征在于：所述步驟（2）中離心的轉速為6000rpm。

4.根據權利要求1所述的一種從蛹蟲草中提取抗腫瘤活性組分的方法，其特征在于：所述步驟（2）中干燥在60℃鼓風干燥箱內進行。

5.根據權利要求1所述的一種從蛹蟲草中提取抗腫瘤活性組分的方法，其特征在于：

所述步驟（3）（a）中制備液相色譜使用的色譜柱填料為粒徑10μm的硅膠、大小為150×250mm，洗脫方式為100%正己烷等度洗脫10min，25%乙酸乙酯-正己烷溶液等度洗脫25min，100%乙酸乙酯等度洗脫15min，上樣量為200ml，流速為700ml/min；

所述步驟（3）（b）中制備液相色譜使用的色譜柱填料為粒徑10μm的硅膠、大小為150×250mm，洗脫方式為100%正己烷等度洗脫10min，10%乙酸乙酯-正己烷溶液洗脫50min，15%乙酸乙酯-正己烷溶液洗脫20min，30%乙酸乙酯-正己烷溶液洗脫15min，60%乙酸乙酯-正己烷溶液洗脫20min，100%甲醇等度洗脫10min，上樣量為400ml，流速為700ml/min；

所述步驟（3）（c）中制備液相色譜使用的色譜柱填料為粒徑10μm的硅膠、大小為150×250mm，洗脫方式為100%乙酸乙酯～100%甲醇梯度洗脫30min，上樣量為400ml，流速為700ml/min；

所述步驟（3）（d）中制備液相色譜使用的色譜柱填料為粒徑10μm的硅膠、大小為21.2×250mm，洗脫方式為100%正己烷等度洗脫8min，20%二氯甲烷-正己烷溶液等度洗脫37min，25%二氯甲烷-正己烷溶液等度洗脫15min，上樣量為2ml，流速為15ml/min。