[發明專利]近平滑假絲酵母ZJPH1305及在手性醇制備中的應用

有效

• 申請號: 201410040143.5
• 申請日: 2014-01-27
• 公開（公告）號: CN103849574A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發明（設計）人: 王普;金保軍;黃金;孫婧;何軍邀
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12P7/42;C12R1/72
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

（一）技術領域

本發明涉及一株近平滑假絲酵母及應用，特別涉及一株新菌株-近平滑假絲酵母(Candida?parapsilosis)ZJPH1305，以及在微生物催化不對稱還原5-(4-氟苯)-5-酮基戊酸制備高光學純度(5S)-(4-氟苯)-5-羥基戊酸中的應用。

（二）背景技術

式（Ⅰ）所示的(5S)-(4-氟苯)-5-羥基戊酸是合成藥物依替米貝(Ezetimibe，商品名為）的重要手性中間體。依替米貝化學名為1-(4-氟苯基)-(3R)-[3-(4-氟苯基)-(3S)-羥基丙基]-(4S)-(4-羥基苯基)-2-氮雜環丁烷酮。2002年美國食品藥品監督管理局(FDA)批準依替米貝用于治療高脂血癥。依替米貝是默克和先靈葆雅研發的一類新型的選擇性膽固醇吸收抑制劑，其被吸收后在肝臟中與葡萄糖醛酸結合，經肝腸循環，幾乎特異地定位于小腸黏膜細胞，然后結合小腸刷狀緣膜小囊泡上膜蛋白，抑制膽固醇的吸收，從而降低膽固醇含量。2002年11月在德國首先上市，同期在美國、英國、瑞士、瑞典上市。研究證實，依替米貝是有效的膽固醇吸收抑制劑，與他汀類降脂藥物聯用效果更好。美國FDA于2004年8月23日正式批準默克和先靈葆雅共同研發的二合一降膽固醇新藥依替米貝/辛伐他汀()上市。是一種復方藥，其可以通過兩個途徑來降低膽固醇：一種途徑是阻止來源于食物的腸內膽固醇的吸收，另一種途徑是抑制肝臟膽固醇的合成。2010年依替米貝()的銷售額為16.66億美元，依替米貝/辛伐他汀復方藥()的銷售額為15.52億美元。

化學法制備(5S)-(4-氟苯)-5-羥基戊酸的工藝條件較為苛刻，反應步驟較多，反應過程中需使用對環境有毒害作用的溶劑；所用的手性催化劑制備較為困難，價格昂貴，反應后存在重金屬殘留問題，且催化劑循環使用效率不理想。采用微生物全細胞催化的生物不對稱還原方法制備(5S)-(4-氟苯)-5-羥基戊酸具有反應條件溫和、立體選擇性高、環境友好等優點。

目前，文獻報道的(5S)-(4-氟苯)-5-羥基戊酸制備方法主要涉及以下幾種：

Kunmar等以5-(4-氟苯)-5-酮基戊酸甲酯為底物，經手性催化劑(-)-B-氯二異蒎茨硼烷的催化還原，水解和酸化等步驟制得(5S)-(4-氟苯)-5-羥基戊酸，產率為78.99%，e.e.值98.36%。該路線的反應條件苛刻，需要在-35℃～-25℃低溫下進行反應，對廠房和設備的要求較高。所用催化劑(-)-B-氯二異蒎茨硼烷價格昂貴，且遇水和空氣極易氧化。反應介質為四氫呋喃。具體反應式如下：

Homann等以5-(4-氟苯)-5-酮基戊酸為底物，從土壤中篩選得到可將5-(4-氟苯)-5-酮基戊酸不對稱還原為(5S)-(4-氟苯)-5-羥基戊酸的菌株--拜耳接合酵母(Zygosaccharomyces?bailii)ATCC?NO.38924，該菌株在30℃條件下轉化24h，產率為15%，e.e.值達99.8%。反應式如下：

（三）發明內容

本發明目的是提供一株可用于微生物催化不對稱還原5-(4-氟苯)-5-酮基戊酸制備高光學純度(5S)-(4-氟苯)-5-羥基戊酸的新菌種--近平滑假絲酵母(Candida?parapsilosis)ZJPH1305，以及該菌種在催化不對稱還原制備(5S)-(4-氟苯)-5-羥基戊酸中的應用。

本發明采用的技術方案是：

本發明提供一株新菌株--近平滑假絲酵母(Candida?parapsilosis)ZJPH1305，該菌株保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏日期為2013年11月8日，地址：中國，武漢，武漢大學，保藏編號：CCTCCNO：M2013559。

本發明所述新菌株按如下方法篩選得到：

（1）菌株篩選

1）富集培養：將從浙江蘭溪、義烏、溫州、安徽安慶、湖北孝感、山西大同等地采集的土樣接種到富集培養基中，置30℃，200rpm的搖床培養5天，待培養液變渾濁后，取1mL培養液轉接至新鮮的富集培養基中，繼續培養5天，如此重復3個循環。富集培養基配方如下：5-(4-氟苯)-5-酮基戊酸50mmol/L，(NH₄)₂SO₄2g/L，KH₂PO₄2g/L，NaCl1g/L，MgSO₄.7H₂O0.5g/L，溶劑為水，pH6.5。