[發(fā)明專利]近平滑假絲酵母ZJPH1305及在手性醇制備中的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410040143.5
• 申請日: 2014-01-27
• 公開（公告）號: CN103849574A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發(fā)明（設計）人: 王普;金保軍;黃金;孫婧;何軍邀
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12P7/42;C12R1/72
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

1.近平滑假絲酵母(Candida?parapsilosis)ZJPH1305，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2013年11月8日，地址：中國，武漢，武漢大學，保藏編號：CCTCC?NO：M2013559。

2.一種權(quán)利要求1所述近平滑假絲酵母ZJPH1305在制備(5S)-(4-氟苯)-5-羥基戊酸中的應用，其特征在于所述的應用為：以5-(4-氟苯)-5-酮基戊酸為底物，以近平滑假絲酵母ZJPH1305經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)獲得的濕菌體為酶源，在25℃～35℃條件下，于pH為6.0～8.5的緩沖液構(gòu)成的反應體系中進行轉(zhuǎn)化反應，反應結(jié)束后，將反應液離心，取上清液，加入等體積的乙酸乙酯萃取兩次，合并萃取層，得到含(5S)-(4-氟苯)-5-羥基戊酸的乙酸乙酯溶液。

3.如權(quán)利要求2所述應用，其特征在于所述反應體系中，底物的初始濃度為4.76～119.05mmol/L，近平滑假絲酵母ZJPH1305濕菌體的添加量以菌體干重計為30.4～91.2g/L。

4.如權(quán)利要求2所述應用，其特征在于所述反應是在25℃～35℃條件下反應12～60小時。

5.如權(quán)利要求2所述應用，其特征在于所述反應體系中還添加有輔助底物構(gòu)成轉(zhuǎn)化體系，所述輔助底物為下列之一：①葡萄糖、②蔗糖、③麥芽糖、④異丙醇、⑤甲醇或⑥乙醇。

6.如權(quán)利要求5所述應用，其特征在于所述輔助底物為葡萄糖、蔗糖或麥芽糖，輔助底物終濃度為20～200g/L轉(zhuǎn)化體系。

7.如權(quán)利要求5所述應用，其特征在于所述輔助底物為異丙醇、甲醇或乙醇，輔助底物體積終濃度為10%～30%。

8.如權(quán)利要求5所述應用，其特征在于所述輔助底物為葡萄糖，所述葡萄糖的終濃度為75～125g/L反應體系。

9.如權(quán)利要求2所述應用，其特征在于所述酶源按如下步驟制備：

1）斜面培養(yǎng)：將近平滑假絲酵母ZJPH1305單菌落接種至斜面培養(yǎng)基，30℃培養(yǎng)2～3天，4℃冰箱保存，獲得斜面菌體；斜面培養(yǎng)基終濃度組成為：葡萄糖15g/L，蛋白胨7.5g/L，酵母膏6g/L，(NH₄)₂SO₄3g/L，KH₂PO₄1.5g/L，NaCl0.75g/L，MgSO₄·7H₂O0.75g/L，瓊脂20g/L，溶劑為水，pH6.5；

2）種子培養(yǎng)：從培養(yǎng)成熟的斜面挑一環(huán)菌體接入裝有100mL種子培養(yǎng)基的250mL搖瓶中，30℃，200rpm培養(yǎng)24小時，獲得種子液；種子培養(yǎng)基終濃度組成為：葡萄糖15g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，(NH₄)₂SO₄2g/L，KH₂PO₄2g/L，NaCl1.0g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，溶劑為水，pH6.5；

3）發(fā)酵培養(yǎng)：將種子液以體積濃度10%的接種量接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，30℃、200rpm搖床培養(yǎng)48h，將發(fā)酵液離心，所得沉淀用pH6.0的磷酸緩沖液洗滌，棄去洗滌液，收集濕菌體即為酶源；所述發(fā)酵培養(yǎng)基終濃度組成同種子培養(yǎng)基。

10.如權(quán)利要求9所述應用，其特征在于所述應用為：將近平滑假絲酵母ZJPH1305經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)獲得的濕菌體加入至0.2M、pH6.0的磷酸緩沖液中，再加入5-(4-氟苯)-5-酮基戊酸和葡萄糖構(gòu)成轉(zhuǎn)化體系，30℃，200rpm搖床振蕩反應24～48小時，反應結(jié)束后將反應液離心，取上清液，加入等體積的乙酸乙酯萃取兩次，合并萃取層，得到含(5S)-(4氟苯)-5-羥基戊酸的乙酸乙酯溶液；所述濕菌體加入量以菌體干重計為30.4～60.8g/L，所述底物初始濃度為4.76～47.62mmol/L，葡萄糖終濃度為100g/L。