[發明專利]一種芽孢桿菌及其篩選方法和應用在審
| 申請號： | 201410040021.6 | 申請日： | 2014-01-27 |
| 公開（公告）號： | CN103789239A | 公開（公告）日： | 2014-05-14 |
| 發明（設計）人： | 谷風林;陳永敢;李積華;賀書珍;徐飛;房一明;譚樂和 | 申請（專利權）人： | 中國熱帶農業科學院香料飲料研究所 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N9/42;C12P7/24;C12P19/02 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 趙青朵;馮瓊 |
| 地址： | 571533 海*** | 國省代碼： | 海南;66 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 芽孢 桿菌 及其 篩選 方法 應用 | ||
1.一種芽孢桿菌（Bacillus?sp.），其特征在于，保藏編號為CGMCC?No.8629。
2.根據權利要求1所述芽孢桿菌，其特征在于，16S?rDNA序列如SEQ?ID?NO:1所示。
3.權利要求1所述芽孢桿菌在產β-D-葡萄糖苷酶、水解香蘭素葡萄糖苷和/或制備香蘭素中的應用。
4.權利要求1所述芽孢桿菌的篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1、取發酵完成的香草蘭豆莢，置于無菌水中，充分震蕩后，將混合液涂布于LB平板培養基上28℃培養，平板培養基上長出菌落后，挑取單菌落劃線純化培養獲得單一菌株；
步驟2、將步驟1獲得的純化后菌株接種于含七葉苷和檸檬酸高鐵氨的LB固體培養基上28℃培養，挑取平板上產生黑色水解圈的菌落，獲得所述芽孢桿菌。
5.根據權利要求4所述篩選方法，其特征在于，步驟1所述LB平板培養基pH為7.0，每升包括10g?NaCl、10g胰蛋白胨、5g酵母提取物以及15g瓊脂。
6.根據權利要求4所述篩選方法，其特征在于，步驟2所述含七葉苷和檸檬酸高鐵氨的LB固體培養基pH為7.0，每升包括10g?NaCl、10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、15g瓊脂、1g七葉苷和2.5g檸檬酸高鐵氨。
7.根據權利要求4所述篩選方法，其特征在于，步驟1所述發酵具體步驟為：
取香草蘭豆莢熱水70℃殺青5min，殺青后豆莢50℃熱風發汗25h，然后再經室溫干燥1個月，最后室溫陳香半年即完成發酵處理。
8.一種制備香蘭素的方法，其特征在于，包括以下步驟：
配置以香蘭素葡萄糖苷為唯一碳源的無機鹽液體培養基，將權利要求1所述芽孢桿菌接種于無機鹽液體培養基中，28℃170rpm搖床培養，即可獲得香蘭素。
9.根據權利要求8所述方法，其特征在于，所述無機鹽液體培養基為pH7.0包括NH4NO31.5g/L、K2HPO41.5g/L、KH2PO40.5g/L、MgSO40.2g/L、NaCl1g/L，香蘭素葡萄糖苷255mg/L的無機鹽液培養基。
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