[發明專利]檢測遺傳突變的方法

無效

• 申請號: 201410039932.7
• 申請日: 2007-04-10
• 公開（公告）號: CN103789434A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 高峰;朱軍
• 申請（專利權）人: 杜克大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 史悅

1.一種在大量的核酸模板中檢測或測定突變或核苷酸修飾的頻率的方法，該方法包括：

i)將大量核酸模板和修飾的3'擴增引物或者修飾的5'擴增引物在使所述修飾的擴增引物固定于半固體支持物中的條件下包埋于所述半固體支持物中；

ii)將步驟(i)獲得的所述半固體支持物與聚合酶、三磷酸脫氧核苷酸(dNTPs)和未修飾的5'或者3'擴增引物接觸；

iii)在使所述修飾和/或未修飾的擴增引物雜交至所述核酸模板以形成與引物結合的模板的條件下處理從步驟(ii)獲得的組合物；

iv)在所述半固體支持物內進行所述與引物結合的模板的擴增，其中所述擴增的雙鏈產物集中在所述與引物結合的模板的周圍；

v)將所述雙鏈擴增產物變性并去除獲得的未固定到所述半固體支持物中的單鏈；

vi)將測序引物與所述步驟(v)獲得的固定化的單鏈雜交，并在帶有不同可檢測標記的至少2種核苷酸存在下，對所述雜交的測序引物進行延伸以形成延伸產物，其中所述核苷酸中的一種在所述固定化單鏈含有所述突變或核苷酸修飾時結合到所述延伸產物中；另外的所述核苷酸在所述固定化單鏈不含所述突變或修飾核苷酸時結合到所述延伸產物中；以及

vii)檢測從步驟(vi)獲得的測序引物的延伸產物，并確定包含所述突變核苷酸或修飾核苷酸的所述核酸模板的存在或頻率。

2.根據權利要求1的方法，其中所述方法是一種測定突變頻率的方法。

3.根據權利要求1的方法，其中所述大量的核酸模板包含雙鏈DNA。

4.根據權利要求l的方法，其中所述大量的核酸模板來源于病原體。

5.根據權利要求4的方法，其中所述病原體為病毒病原體或細菌病原體。

6.根據權利要求5的方法，其中所述病原體是人類免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)或結核分枝桿菌(TB)。

7.根據權利要求5的方法，其中所述抗原為抗藥性病原體。

8.根據權利要求1的方法，其中所述大量的核酸模板來源于癌細胞的基因組。

9.根據權利要求8的方法，其中所述癌細胞為人類癌細胞。

10.根據權利要求l的方法，其中所述癌細胞來源于活檢組織、血液或排出物。