[發明專利]一種屎腸球菌菌粉的制備與應用

有效

• 申請號: 201410039346.2
• 申請日: 2014-01-27
• 公開（公告）號: CN103820363A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 宋鐵英;陳曦;李素一;林晨韜;陳敘
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/16;C12R1/46
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明屬于飼料添加劑加工領域，具體涉及了一種屎腸球菌菌粉的制備與應用。?

背景技術

屎腸球菌被認為是一種可在飼料中添加的腸道益生菌。大量研究表明，益生菌的應用是建立和維持動物腸道菌群平衡的最有效方式。在現代養殖條件下，盡早建立和維持動物腸道的菌群平衡是提高養殖動物生長機能和抗病力的可行途徑。在飼料中添加益生菌等微生態飼料添加劑，一方面，益生菌進入消化道后，大量繁殖，并與消化道有益菌形成強有力的優勢菌群，抑制其它外來微生物在胃腸道內的定植或增殖，從而維持腸道菌體平衡。另一方面，益生菌通過產生細菌素、過氧化氫、乳酸乃至有廣譜抗菌作用的物質，能夠抑制或殺滅其它有害微生物。同時，通過提高巨噬細胞和單核細胞的活性、促進免疫細胞分泌細胞因子，益生菌可以提高機體的免疫細胞水平。此外，益生菌能產生多種營養物質和消化酶，或刺激腺體對消化酶的分泌，從而促進營養物質的消化。更為重要的是采用益生菌添加劑能夠加固腸道屏障功能，增加腸絨毛長度和隱窩深度，進一步加強機體對營養物質的消化吸收，提高生長效率。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種屎腸球菌菌粉的制備與應用，該菌粉可調整豬腸道菌群，促進畜禽高效增重，且生產工藝簡單，成本低。?

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：?

一種屎腸球菌，所述的屎腸球菌為屎腸球菌（Enterococcus?faecium）BBH201305001，已于2013年10月9日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC，其地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，菌種保藏代號：CGMCC?No.8296。

一種屎腸球菌的菌粉制備方法，其包括以下步驟：?

a．將屎腸球菌菌種接種于MRS液體培養基，在25～40℃有氧或兼性條件下培養8～16小時，成為種子液；

b．將步驟a所獲得的種子液接種在發酵罐中進行發酵培養，采用改良的MRS液體培養基為發酵培養基，在25～40℃厭氧條件下，采用定時或連續補料分批發酵方式培養8～48小時；

??c．將b步驟所獲得的發酵液加入質量分數為10%~40%的干燥保護劑和卵黃粉，添加方式為：發酵液1000ml中，加入質量分數為0.2%~0.5%的吐溫60，然后緩緩加入干燥保護劑，邊加邊攪拌，直至混勻；然后在混合勻漿中加入質量分數為5~15%的卵黃粉，邊加邊攪拌，直至混勻制成菌液混合物，繼續攪勻后進行噴霧干燥制成菌粉。

所述的干燥保護劑中各組分的質量比為：阿拉伯膠：β-糊精：蔗糖：淀粉=1~10：5~30：1~4：2~10。?

改良MRS液體培養基是在每升MRS培養基中加有麥芽糖5?~10g，蛋白胨10~15g，牛肉膏8~10g，酵母膏5~10g，葡萄糖?10~20.0g,?磷酸氫二鉀1～5g，乙酸鈉1~10g，硫酸鎂0.?2～lg，硫酸錳0.001～0.2g，檸檬酸三胺2～5g，吐溫80?1g，純凈水l升，調節pH值5.5～8.?0。?

所述的噴霧干燥工藝指標：進口溫度控制在155-165℃之間，出口溫度控制在50-70℃之間，風壓指數控制在25-30?Mpa之間，噴霧頭變頻為400Hz。?

將噴霧干燥后的菌粉用生理鹽水按比例稀釋后計數，顯示噴霧干燥后屎腸球菌菌粉中活菌數為400-600億/g。?

一種屎腸球菌的菌粉可作為飼料添加劑使用。?

菌株的篩選與鑒定：

從豬場附近土壤取樣，接種到MRS固體培養基平板上，于37℃厭氧環境中培養24h，挑取平板上的單菌落接種到MRS固體培養基斜面上進行2次純化培養得到純化菌落。該菌落在MRS培養基上生長良好，是兼性厭氧菌。菌落成乳白色圓形，表面較光滑，菌落直徑約0.8~2mm。革蘭氏染色陽性，鏡檢發現，菌體呈球形，成單或成串存在，無芽孢。菌株送交中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，經生理生化鑒定及16S?rDNA序列分析鑒定，確定其屬于腸球菌屬、屎腸球菌種（Enterococcus?faecalis），命名為屎腸球菌（Enterococcus?faecalis）BBH201305001。

表1??細胞形態及理化實驗結果?

本發明的優點在于：可調整豬腸道菌群，提高機體的免疫細胞水平，加固腸道屏障功能，加強機體對營養物質的消化吸收，促進畜禽高效增重，生產工藝簡單，可提供成本低的屎腸球菌菌粉。

附圖說明