[發明專利]檢測羥基自由基的比率型熒光探針及合成方法和用途

無效

• 申請號: 201410038820.X
• 申請日: 2014-01-27
• 公開（公告）號: CN103760145A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 莊梅;田陽
• 申請（專利權）人: 同濟大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N21/76;G01Q60/20;G01Q60/22
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 張磊

技術領域

本發明屬于生物檢測技術及臨床醫學檢測領域，具體涉及一種檢測羥基自由基的比率型熒光探針及合成方法和用途。

背景技術

活性氧是生物體生命代謝不可避免的副產物，它在機體的先天性免疫、信號轉導、細胞的增生、分化、凋亡等方面有重要的作用，但是同時，活性氧自由基對生物機體也存在著氧化損傷，使組織細胞的結構發生破壞性修飾，損傷正常組織細胞的形態和功能（文獻1：Chen?X.,?.Probing?oxidative?stress:?Small?molecule?fluorescent?sensors??of?metal?ions,?reactive?oxygen?species,?and?thiols，Coord.?Chem.?Rev.，2011，40：4783-4804）。

羥基自由基是目前已知活性氧中對生物體毒性最強、危害最大的一種自由基，它能夠造成細胞中DNA、脂質、糖類、蛋白質等分子過度氧化，而造成細胞傷害。相關研究證據顯示，這些損傷可進一步造成多種退化性疾病、老化、突變以及癌癥的形成（Tang,?B.，Probing?Hydroxyl?Radicals?and?Their?Imaging?in?Living?Cells?by?Use?of?FAM–DNA–Au?Nanoparticles，Chem.?Eur.?J.，2008,?14,?522-528），因此，對羥基自由基的測定尤為重要。

羥基自由基的壽命短，含量低，對其的檢測是化學分析和生命科學分析領域最困難的問題之一。目前，國內外文獻報道的檢測羥基自由基的方法主要有電子自旋共振法（Yim,?M.?B.，Copper,?zinc?superoxide?dismutase?catalyzes?hydroxyl?radical?production?from?hydrogen?peroxide，Proc.?Natl.?Acad.?Sci.?U.?S.?A.，1990，87，5006-5010）,電化學法（Li,?L.，An?Electrochemical?Strategy?for?Fast?Monitoring?of?^·OH?Released?from?Live?Cells?at?Electroactive?FcHT-Functional?Surface?Amplified?by?Au?Nanoparticles，Chem.?Commun.，2013，49，1279-1281），以及熒光法（Czili,?H.，Applicability?of?coumarin?for?detecting?and?measuring?hydroxyl?radicals?generated?by?photoexcitation?of?TiO₂?nanoparticles，Appl.?Catal.?B.，2008，81，295-302）等。熒光分析法具有靈敏度高、選擇性好、重現性高、線性范圍寬、方法簡便快速等優點，且與激光共聚焦顯微技術結合后，可以實現活體細胞和組織內目標物的“實時、定量、可見”的檢測。目前已報道用于檢測細胞內羥基自由基的探針多為單發射型，不能有效避免測定環境所引起的誤差。

比率型熒光探針測定時包含兩個熒光信號峰，其中一個作為參比熒光型號，另一個作為對待測物有響應的響應熒光信號，根據兩個熒光信號的光強度比值度待測物進行定量，由于參比熒光的存在，在測定的過程中可以有效的避免復雜環境變化所引起的誤差（A.?Zhu.?Carbon-Dot-Based?Dual-Emission?Nanohybrid?Produces?a?Ratiometric?Fluorescent?Sensor?for?In?Vivo?Imaging?of?Cellular?Copper?Ions，Angew.?Chem.?Int.?Ed.，2012，51:?7185-7189）。

發明內容

?本發明的目的之一是提供一種對細胞滲透性好，毒副作用小，適用于生物體內羥基自由基檢測的比率型熒光探針。

本發明的目的之二是提供一種工藝簡單的該熒光探針的合成方法。

本發明的目的之三是提供該熒光探針的用途。