[發(fā)明專利]一種用于TAFI含量體外檢測的試劑盒及其體外檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410038769.2
• 申請日: 2014-01-26
• 公開（公告）號: CN103760352A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李文欣;劉峰
• 申請（專利權(quán)）人: 遼寧邁迪生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 劉陽

1.一種用于TAFI含量體外檢測的試劑盒，其特征在于：由TAFI快速檢測試紙、樣本稀釋液組成，其中TAFI快速檢測試紙由PVC板條、樣品墊、金墊、NC膜和吸水紙組成；樣本稀釋液為磷酸鹽緩沖液（PH6.8-7.4）。

2.按權(quán)利要求1所述用于TAFI含量體外檢測的試劑盒，其特征在于：所述NC膜在檢測線T線位置和質(zhì)控線C線位置固定兩種蛋白原料。

3.按權(quán)利要求1所述用于TAFI含量體外檢測的試劑盒，其特征在于：樣本稀釋液由0-0.68%磷酸二氫鉀、0-0.4%NaOH、0-1%Casein-Na、0-1%TWEEN20、0-1%PVP40、0-1%PEG20000、0-2%EDTA、0-0.5%SDS和余量為水組成。

4.按權(quán)利要求1所述用于TAFI含量體外檢測的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒示蹤標(biāo)志物為膠體金。

5.一種按權(quán)利要求1所述用于TAFI含量體外檢測的試劑盒的制備方法，其特征在于：TAFI快速檢測試紙的制備方法為：

a.金墊的制備

1）取1ml膠體金加0-6ｕl的0.2M?K₂CO₃，混合后再加入10-20ug濃度為3.68mg/ml的4E7抗體，得到體積為2.7-5.4ｕl的4E7抗體,混勻靜置5-20min，加5-20ｕl?BSA、PEG或者Casein-Na封閉，再次混勻靜置5-20min，離心5-10min（9000r/min），棄上清，沉淀用30-100ｕl復(fù)溶液復(fù)溶；

2）取1ml膠體金，加0-6ｕl的0.2M?K₂CO₃，混合后再加入15-25ug濃度為10mg/ml的兔IgG，得到體積為1.5-2.5ｕl兔IgG,混勻靜置10min，加5-20ｕl20%的BSA、PEG或者Casein-Na溶液，混勻靜置5-20min，離心5-10min（9000r/min），棄上清，沉淀用50ｕl復(fù)溶液復(fù)溶；

3）噴金：將4E7抗體和兔IgG各復(fù)溶的50ｕl兩者1:1混合至100ｕl，混合后的樣本通過加壓的方式，以霧狀均勻噴在玻璃纖維素膜上，45℃烘干0.5h-2h，密封干燥保存即為金墊。

b.NC膜的制備

包被工藝：將3B1抗體用PBS稀釋至0.3-0.8mg/ml，羊抗兔用PBS稀釋至0.5-1.5mg/ml分別固定在NC膜上T線和C線位置上，包被后室溫晾干后，密封干燥保存待用；

c.安裝

將樣本墊、金墊、PVC板、固定好抗體的NC膜、吸水紙組裝成試紙條即可，所述樣本墊采用玻璃纖維素膜。

6.按權(quán)利要求4所述用于TAFI含量體外檢測的試劑盒，其特征在于：試紙制作完成后直接裝入卡殼中，卡殼上對應(yīng)試紙條的樣品墊處設(shè)置一個加樣孔。

7.按權(quán)利要求4所述用于TAFI含量體外檢測的試劑盒，其特征在于：復(fù)溶液為Tris0-0.5%；pvp400-1%；BSA0-1%；PEG200000-0.5%；10%蔗糖0-5%；TWEEN200-0.8%；10%疊氮鈉2/萬，余量為水。

8.按權(quán)利要求4所述用于TAFI含量體外檢測的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒檢測的血清或血漿樣本中標(biāo)志物的濃度范圍為5-40ug/ml.樣本稀釋400-600倍使用。

所述試劑盒檢測結(jié)果以T/C比值為測試值，即T線檢測值和C線檢測值之比為最終測試值。

9.一種按權(quán)利要求1所述試劑盒用于TAFI含量體外檢測的方法：

步驟一??采集個體生物樣品立即于30分鐘內(nèi)，4℃條件下離心取上清或樣本靜止后的上清作為待檢樣品，置于冰盒1小時內(nèi)使用或-20℃保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟二??取樣本，用樣本稀釋液進(jìn)行稀釋，可采用一步稀釋或兩步稀釋均可，稀釋倍數(shù)為400-600倍，稀釋后將樣本加到相應(yīng)加樣孔內(nèi)，10min后將樣本放入檢測儀器中，即可得出檢測最終結(jié)果。