[發(fā)明專利]人脂肪間充質(zhì)干細胞提取物及其凍干粉和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410037863.6
• 申請日: 2014-01-26
• 公開（公告）號: CN103784474A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發(fā)明（設計）人: 陳海佳;王一飛;舒輝萍;劉秋英;馬巖巖
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州賽萊拉生物科技有限公司
• 主分類號: A61K35/34
• 分類號: A61K35/34;A61K8/98;A61P17/02;A61Q19/08;A61Q19/02
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發(fā)明涉及干細胞在生物醫(yī)藥或醫(yī)學美容中使用的技術，尤其涉及人脂肪間充質(zhì)干細胞在生物醫(yī)藥或醫(yī)學美容中的使用。

背景技術

脂肪組織來源廣泛、取材容易、細胞分離效率高、給患者帶來的創(chuàng)傷較少、并且不涉及倫理問題，因此日益受到廣泛重視。

人脂肪間充質(zhì)干細胞是脂肪組織中的一類多能性干細胞，其能夠分泌多種生物活性物質(zhì)，包括蛋白質(zhì)、多肽及細胞因子等，比如干細胞生長因子（SCGF）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、胰島素樣生長因子（IGF）、肝細胞生長因子（HGF）和轉(zhuǎn)化生長因子等，這些細胞生長因子能夠控制或者維持受傷組織細胞，引導其自身修復。除此之外，人脂肪間充質(zhì)干細胞中還含有多種膜蛋白質(zhì)及生物活性因子等多種成分，這些成分相互協(xié)調(diào)相互補充，具有復雜的生理作用，能夠?qū)υS多組織器官產(chǎn)生影響，因此具有比較好的抗光老化、抗氧化、抗皺、美白肌膚、傷口愈合、細胞修復等功效。

目前，雖然已有研究利用特定的誘導條件體外誘導干細胞分泌上清用于醫(yī)療、化妝品等方面，但是這種條件培養(yǎng)基是應用特定的細胞因子誘導干細胞分泌某些特定的因子從而達到療效，細胞因子本身價格昂貴，使得干細胞的應用成本異常增高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種具有多種生物學活性，可用于生物醫(yī)藥、精細化工領域的人脂肪間充質(zhì)干細胞提取物。

本發(fā)明的另一個目的是提供上述人脂肪間充質(zhì)干細胞提取物在制備傷口愈合藥物或細胞修復藥物等生物醫(yī)藥產(chǎn)品，或在制備美白產(chǎn)品或皮膚抗皺產(chǎn)品等精細化工產(chǎn)品中的應用。

本發(fā)明的另一個目的是提供上述人脂肪間充質(zhì)干細胞提取物的凍干粉。

本發(fā)明的另一個目的是提供上述人脂肪間充質(zhì)干細胞提取物凍干粉的制備方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供上述人脂肪間充質(zhì)干細胞提取物的凍干粉在制備傷口愈合藥物或細胞修復藥物等生物醫(yī)藥產(chǎn)品，或在制備美白產(chǎn)品或皮膚抗皺產(chǎn)品等精細化工產(chǎn)品中的應用。

本發(fā)明的上述目的是通過如下方案予以實現(xiàn)的：

人脂肪間充質(zhì)干細胞提取物，該提取物是由如下方法制備而得：

步驟1.

將人脂肪間充質(zhì)干細胞經(jīng)原代分離培養(yǎng)后，進行傳代培養(yǎng)，取傳代培養(yǎng)的P3～P30代人脂肪間充質(zhì)干細胞，利用細胞生長液培養(yǎng)至細胞80%融合時，棄掉培養(yǎng)液，先用磷酸鹽緩沖液洗滌細胞三次，然后加入無血清培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)72小時后，收集無血清培養(yǎng)液，而未被收集的細胞進行后續(xù)處理；

步驟2.

將步驟1未被收集的細胞利用消化液消化后，超聲破碎儀破碎細胞，離心后收集上清；

步驟3、

將步驟1收集的無血清培養(yǎng)液和步驟2收集的上清混合后，過濾，收集過濾液對其濃縮，所得濃縮液再進行除菌處理后，則制備得到所需人脂肪間充質(zhì)干細胞提取物。

上述步驟1中，所述將人脂肪間充質(zhì)干細胞經(jīng)原代分離培養(yǎng)中，原代分離方法和培養(yǎng)方法采用本領域技術人員的常規(guī)操作即可。

上述步驟1中，所述細胞生長液是指含有10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)液，并且該培養(yǎng)液中還含有抗細菌抗生素；所述抗細菌抗生素為青霉素和鏈霉素兩種，其中青霉素在細胞生長液中的終濃度為200?U/ml，鏈霉素在細胞生長液中的終濃度為250?U/ml；所述含有10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)液為向市售的基礎DMEM/F12培養(yǎng)液中加入終濃度為10%的胎牛血清，并加入終濃度為200?U/ml的青霉素和終濃度為250?U/ml的鏈霉素即為本發(fā)明的細胞生長液。

上述步驟1中，所述磷酸鹽緩沖液為pH值為7.0～7.2的PBS溶液。

上述步驟1中，所述細胞在無血清培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)72小時，這里的無血清培養(yǎng)液為市售產(chǎn)品。

上述步驟1中，具體操作時，將傳代培養(yǎng)的不同代細胞分別進行處理，如：將P3代的人脂肪間充質(zhì)干細胞利用細胞生長液培養(yǎng)至細胞80%融合時，棄掉培養(yǎng)液，先用磷酸鹽緩沖液洗滌細胞三次，然后將細胞加入到無血清培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)72小時后，收集得到P3的無血清培養(yǎng)液；將P4代的人脂肪間充質(zhì)干細胞利用細胞生長液培養(yǎng)至細胞80%融合時，棄掉培養(yǎng)液，先用磷酸鹽緩沖液洗滌細胞三次，然后將細胞加入到無血清培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)72小時后，收集得到P4代的無血清培養(yǎng)液等等；然后將P3～P30代人脂肪間充質(zhì)干細胞分別得到的無血清培養(yǎng)液收集合并后，則得到實施例1收集的無血清培養(yǎng)液；同時，將P3～P30代人脂肪間充質(zhì)干細胞分別得到的未被收集的細胞收集合并后，一起進行后續(xù)處理。