[發(fā)明專利]人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物及其凍干粉和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410037863.6
• 申請日: 2014-01-26
• 公開（公告）號: CN103784474A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳海佳;王一飛;舒輝萍;劉秋英;馬巖巖
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州賽萊拉生物科技有限公司
• 主分類號: A61K35/34
• 分類號: A61K35/34;A61K8/98;A61P17/02;A61Q19/08;A61Q19/02
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物，其特征在于該人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物是由如下方法制備而得：

步驟1.

將人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)原代分離培養(yǎng)后，進(jìn)行傳代培養(yǎng)，取傳代培養(yǎng)的P3～P30代人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，利用細(xì)胞生長液培養(yǎng)至細(xì)胞80%融合時，棄掉培養(yǎng)液，先用磷酸鹽緩沖液洗滌細(xì)胞三次，然后加入無血清培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)72小時后，收集無血清培養(yǎng)液，而未被收集的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)處理；

步驟2.

將步驟1未被收集的細(xì)胞利用消化液消化后，超聲破碎儀破碎細(xì)胞，離心后收集上清；

步驟3、

將步驟1收集的無血清培養(yǎng)液和步驟2收集的上清混合后，過濾，收集過濾液對其濃縮，所得濃縮液再進(jìn)行除菌處理后，則制備得到所需人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物，其特征在于所述步驟1中，細(xì)胞生長液是指含有10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)液，該培養(yǎng)液中還含有終濃度為200?U/ml的青霉素和終濃度為250?U/ml的鏈霉素。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物，其特征在于所述步驟2中，消化液為經(jīng)0.22μm的濾膜過濾除菌的0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA混合消化液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物，其特征在于所述步驟2中，超聲破碎儀破碎細(xì)胞的條件為4℃、400W、超聲3s、間隔6s，99個循環(huán)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物，其特征在于所述步驟3中，步驟1收集的無血清培養(yǎng)液和步驟2收集的上清的混合比例為1:1，體積比。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物，其特征在于所述步驟3中，過濾是采用孔徑為0.45μm的濾膜過濾，濃縮是采用截留分子量為3KD的過濾膜濃縮至原體積的的1/10，除菌處理是采用無菌的0.22μm濾膜過濾除菌。

7.權(quán)利要求1-6所述任一項的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物在制備傷口愈合藥物、細(xì)胞修復(fù)藥物、美白產(chǎn)品或皮膚抗皺產(chǎn)品中的應(yīng)用。

8.人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物凍干粉，其特征在于該凍干粉是由權(quán)利要求1-6所述任一項的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物經(jīng)凍干處理制備而得。

9.權(quán)利要求8所述人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物凍干粉的制備方法，其特征在于該制備方法包括如下步驟：

向人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物中加入賦形劑和水，混合后過濾除菌，然后進(jìn)行凍干處理，則制備得到人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物凍干粉；所述賦形劑采用甘露醇、海藻糖或蔗糖中的任意一種，賦形劑占人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物總重量的5～10%；所述凍干處理的凍干溫度為-20～-35℃、真空度為50～200Pa，凍干48小時。

10.權(quán)利要求8所述人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞提取物凍干粉在制備傷口愈合藥物、細(xì)胞修復(fù)藥物、美白產(chǎn)品或皮膚抗皺產(chǎn)品中的應(yīng)用。