[發明專利]短瓣石竹的組織培養繁殖方法

無效

• 申請號: 201410036700.6
• 申請日: 2014-01-26
• 公開（公告）號: CN103749307A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 閆志剛;韋瑩;董青松;吳慶華;胡秀月;黃保成;黃英群;劉凡
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區藥用植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104
• 代理人: 楊立華

技術領域

本發明屬于植物組織培養繁殖技術領域，尤其涉及一種短瓣石竹的組織培養繁殖方法。

背景技術

短瓣石竹，來源于石竹科短瓣石竹屬植物短瓣（花Brachystemma?calycinum?D.Don），為石竹科單屬種植物；其根或全草入藥稱土牛膝（壯）、抽筋草（瑤）等，味甘、淡，性平；有清熱解毒、舒筋活絡、祛風除濕、利尿消腫、接骨生肌的功效，用于風濕痹痛、跌打損傷、接骨、腎炎水腫、骨髓炎、瘡瘍癤腫、淋巴結結核等癥。短瓣石竹分布于我國廣西、四川、云南等省區，主產于桂西的隆林、田林、凌云、那坡、靖西、天峨、南丹、東蘭等地。

短瓣石竹是一味常用傳統壯瑤藥材。在桂西的壯瑤地區，大多居民常用此藥與豬筒骨同煲，給兒童強筋健體，給病后體虛的人調養身體；民間醫生以此藥為主藥，治療腰肌勞損、風濕性關節炎、手足痙攣、病后虛弱等癥有奇效。鑒于其確切功效，廣西偉健藥業有限公司將其開發成獨家中藥品種“除瘀理筋散”，暢銷港澳及東南亞地區；同時，偉健藥業還根據民間煲湯的用法和粵港澳居民喜歡煲湯的習慣，擬將其開發成象雞骨草、土茯苓、牛大力這樣的湯料。隨著其系列產品的不斷開發，生產規模的不斷擴大，原料需求從2007年的幾百公斤增至5噸左右，使得其資源日漸緊缺，藥材收購從本土田林縣至周邊的隆林、凌云等縣再至鄰省云南、貴州等地，現有野生資源已難以滿足日益擴大的生產規模的需要。為加強對短瓣石竹的保護和開發利用，需大力推廣短瓣石竹的栽培種植，要實現其人工栽培，首要解決的問題就是種苗的繁育。目前短瓣石竹的主要繁育方式為扦插及分株繁育，但這種繁殖方式很難實現短期內大量繁殖種苗，且經過多代分株后，植株體內毒素增多，影響植株的健壯成長；而采用生物技術組織培養技術，可以加速其繁殖速度獲得大量試管苗，可滿足種苗市場的需要。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種操作簡便易行、培養周期短、繁殖快速成活率高的短瓣石竹的組織培養繁殖方法。

為解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案：短瓣石竹的組織培養繁殖方法，包括以下步驟：

（1）外植體的取材與消毒：取短瓣石竹剪切成2-3cm的帶芽莖段作為外植體進行消毒；

（2）無菌試管苗的獲取：將消毒好的外植體置于誘導培養基中進行不定芽誘導發芽得到無菌試管苗；

（3）試管苗繁殖培養：將無菌試管苗置于增殖培養基中進行培養獲得大量不定芽；

（4）試管苗壯苗培養：將繁殖后的不定芽置于壯苗培養基中進行壯苗培養得到健壯植株；

（5）試管苗生根培養：將健壯植株置于生根培養基中培養得到完整的帶根苗；

（6）試管苗煉苗移栽：篩選完整的帶根苗進行煉苗后移植于基質中培養，再移栽至大田；

誘導培養基以MS為基本培養基，附加4.5g·L^-1瓊脂，30g·L^-1蔗糖，培養基pH值為5.8，并添加1.0mg·L^-1的6-芐基腺嘌呤（6-BA）、0.1mg·L^-1的萘乙酸（NAA）；

增殖培養基以MS為基本培養基，附加4.5g·L^-1瓊脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培養基pH值為5.8，并添加0.1-2.0mg·L^-1的6-芐基腺嘌呤（6-BA）、0.01-1.0mg·L^-1的萘乙酸（NAA）、0.1-0.5mg·L^-1的吲哚乙酸（IAA）；

壯苗培養基以MS為基本培養基，附加4.5g·L^-1瓊脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培養基pH值為5.8，并添加0.1-1.5mg·L^-1的6-芐基腺嘌呤（6-BA）、0.1-2mg·L^-1的萘乙酸（NAA）；

生根培養基以1/2MS為基本培養基，附加4.5g·L^-1瓊脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培養基pH值為5.8，并添加0.05-1.0mg·L^-1的吲哚丁酸（IBA）、0.5-2.0mg·L^-1的萘乙酸（NAA）。